[发明专利]基于三维细胞培养的3D细胞培养基及其建立遗传毒性检测体系的方法

权利要求书

1.一种基于三维细胞培养的3D细胞培养基，其特征在于，所述3D培养基为由预热的无菌的2×Ham’s F12培养液与预热的无菌的质量比为1％的琼脂糖溶液按照1：1体积比混合制成。

2.一种利用如权利要求1所述的基于三维细胞培养的3D细胞培养基建立遗传毒性检测体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备3D细胞培养基

将预热的无菌的2×Ham’s F12培养液与预热的无菌的质量比为1％的琼脂糖溶液按照1：1体积比混合，铺在培养皿中，待冷却后，获得胶状Ham’s F12培养基，即为3D细胞培养基；

(2)A_L3D细胞的培养

步骤一、将A_L细胞接种于3D细胞培养基中，置于CO₂细胞培养箱中培养；

步骤二、每2天换液一次，具体步骤为：将培养的A_L细胞离心，去上清，加入新鲜的无菌的Ham’s F12完全培养液混匀，重新接种在3D细胞培养基上；

步骤三、培养若干天后，获得3D细胞的遗传毒性检测体系。

3.根据权利要求2所述的一种基于三维细胞的遗传毒性检测体系的建立方法，其特征在于，所述步骤(1)中，胶状Ham’s F12培养基在培养皿中的铺设厚度为4mm。

4.根据权利要求1所述的一种基于三维细胞的遗传毒性检测体系的建立方法，其特征在于，所述步骤一中，A_L细胞的接种量为3×10⁶个。

5.根据权利要求2所述的一种基于三维细胞的遗传毒性检测体系的建立方法，其特征在于，所述步骤一中，置于CO₂细胞培养箱中培养的条件为：37℃，CO₂含量为5％体积比。

6.根据权利要求2所述的一种基于三维细胞的遗传毒性检测体系的建立方法，其特征在于，所述步骤二中，A_L细胞离心的条件为：1000g下离心3min。

7.根据权利要求2所述的一种基于三维细胞的遗传毒性检测体系的建立方法，其特征在于，所述步骤三中，培养5～7天，获得3D细胞的遗传毒性检测体系。

8.根据权利要求2所述的一种基于三维细胞的遗传毒性检测体系的建立方法，其特征在于，所述步骤(2)之后还包括步骤(3)3D细胞的遗传毒性检测体系的检测步骤，所述检测步骤包括3D细胞特性指标检测和体系灵敏性检测。

9.根据权利要求8所述的一种基于三维细胞的遗传毒性检测体系的建立方法，其特征在于，所述3D细胞特性指标检测包括3D细胞形态、直径、细胞数、细胞活性、本底基因突变率和基因表达量检测，所述体系灵敏性检测包括诱变剂处理的基因突变率检测。