[发明专利]一种铁皮石斛化学消毒组培方法

权利要求书

1.一种铁皮石斛化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：

(1)培养容器消毒：将培养瓶瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L乳酸链球菌素+100mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；

(2)培养基配制：诱导培养基为MS+1～3mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为：MS+1.0～2mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；壮苗培养基为MS+0.1～0.5mg/L 6-BA+0.5～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.5～1.5mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-BA，指6-苄氨基嘌呤；所述NAA，指〆-萘乙酸；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；

(3)诱导培养：取健壮的铁皮石斛茎段，剪除叶、根，洗净后在无菌操作台上切成带有茎节的1～2cm小段，于体积比为75％酒精中浸20s，然后在重量比为0.1％升汞溶液中消毒10～20min，取出用无菌水冲洗3次后，接种于诱导培养基上，培养40d后出现黄绿色斑点，60d后斑点变绿出现小芽；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1400lx；

(4)增殖培养：将诱导培养的小芽转入增殖培养基中，每30d转接一次，大量增殖丛生芽；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1400lx；

(5)壮苗培养：将增殖培养的丛生芽接种到壮苗培养基上，培养30d成为丛生芽苗；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1400lx；

(6)生根培养：取壮苗培养的高度为4～6cm的丛生芽苗，切成单株，接种到生根培养基上，25d后形成完整植株；培养室温度为25℃，光照12h，光照强度为1500lx；

(7)瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后移栽至铁皮石斛的栽培基质，所述栽培基质，指含有占基质体积为1/2的发酵后的花生壳、或发酵后的松树皮、或泥炭、或锯末、或上述各原料的混合物，以及占基质体积1/2的碎石、珍珠岩，然后，在基质表面覆以苔藓；大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为15～30℃。

2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛化学消毒组培方法，其特征在于所述诱导培养基为MS+3mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+70mg/L次氯酸钠+3mg/L乳酸链球菌素+20mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8。

3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛化学消毒组培方法，其特征在于所述增殖培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+60mg/L次氯酸钠+3mg/L乳酸链球菌素+20mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8。

4.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛化学消毒组培方法，其特征在于所述壮苗培养基为MS+0.3mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+50mg/L次氯酸钠+3mg/L乳酸链球菌素+20mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8。

5.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛化学消毒组培方法，其特征在于所述生根培养基为1/2MS+1mg/L NAA+50mg/L次氯酸钠+3mg/L乳酸链球菌素+20mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8。