[发明专利]一种从葱白中提取葱酶的方法

说明书

技术领域

本发明属于葱白提取物的方法，具体涉及一种从葱白中提取葱酶的方法。

背景技术

    葱白是百合科植物分葱的鳞茎。葱白中所含的化学成分主要是有机含硫化合物，其含量要比葱叶高，且葱白中有多种不饱和脂肪酸。中药药理学研究表明，葱白提取物具有抗心绞痛、抗动脉粥样硬化、对心肌缺血再灌注影响以及对缺糖缺氧心肌细胞的保护作用，能够明显改善冠心病心绞痛患者心绞痛发作的次数和程度；降血脂和胆固醇，抗氧化损伤，保护血管内皮，减轻球囊损伤后再狭窄的功效，以其为原料的相应产品的开发和应用有着很好前景。与葱属另一物质大蒜相似，葱白中存在着一种酶，和其相应有机硫化物底物，当葱白细胞破碎的条件下，二者即结合，反应生成丙酮酸和硫代亚磺酸酯类物质。硫代亚磺酸酯类化合物是葱属众多植物中含硫化合物的前体物质，也是该属物质中众多生物活性的关键物质。该物质非常不稳定，很容易分解为各种含硫化合物。我们前期已通过对葱白进行酶解和杀酶两种不同方法处理后的比较，发现其含有机硫化合物出现明显差异，因此对葱白生物活性的研究及开发利用过程中，对含硫化合物的前体物质的研究则成了关键之一，所以对其起重要作用的蒜氨酸酶的研究具有重要的意义。

现阶段，对葱白同属物质—大蒜中蒜氨酸酶的研究已经很深入，但是关于葱白中酶的研究则鲜有报道。虽然这两种物质中含硫化合物产生的原理相似，两种酶的功能也有一定的相似性，但是不同的酶之间，在理化性质及酶动力学特性上存在着一定的差别。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从葱白中提取葱酶的方法，以解决上述问题。

本发明的技术方案是:

（1）取新鲜大葱，洗净晾干后，取葱白50g加入250ml浸提液在-15℃的环境下静置30小时，其中，浸提液由甲醇、三氯甲烷、水三者以60:25：15的比例混合而成；

（2）将浸提液与葱白分离，置于分液漏斗中，加入100ml水和100ml三氯甲烷，静置萃取，完全分层后去上层水相，浓缩去除甲醇，浓缩液用纯化水定容至100ml，于4℃保存；

（3）将PH为6.5的Na-K磷酸盐缓冲液＋10％甘油，预冷12h后，加入浓缩液中，同时加入浓度为20umol·L－１的5’－磷酸吡哆醛，得到溶液a；

（4）取溶液a，在－40℃的温度下预冻3小时取出，解冻后；在-20℃的温度下冷冻3小时取出，解冻后；在-0℃的温度下冷冻3小时取出，解冻后；在10℃下静置3小时取出，冷却后；在在20℃下静置3小时取出，冷却后；在35℃下静置3小时取出，冷却，得到溶液b；

（5）在4℃条件下，向溶液b中缓慢加入15％（m／v）PEG8000，持续搅拌30min，然后在4℃下，以转速为8000r·min－1高速离心20min，弃上清，得蛋白质沉淀物；

（6）将沉淀物用PH6.5的Na-K缓冲液溶解，装入预处理好的透析袋中，于4℃条件下透析6h，每2h更换一次透析液，将透析处理过的蛋白质溶液进行冻干处理。

本发明的有益效果：本发明的方法工艺简单，得到的葱酶纯度高，有害杂质残留量少。

具体实施方式

（1）取新鲜大葱，洗净晾干后，取葱白50g加入250ml浸提液在-15℃的环境下静置30小时，其中，浸提液由甲醇、三氯甲烷、水三者以60:25：15的比例混合而成；

（2）将浸提液与葱白分离，置于分液漏斗中，加入100ml水和100ml三氯甲烷，静置萃取，完全分层后去上层水相，浓缩去除甲醇，浓缩液用纯化水定容至100ml，于4℃保存；

（3）将PH为6.5的Na-K磷酸盐缓冲液＋10％甘油，预冷12h后，加入浓缩液中，同时加入浓度为20umol·L－１的5’－磷酸吡哆醛，得到溶液a；

（4）取溶液a，在－40℃的温度下预冻3小时取出，解冻后；在-20℃的温度下冷冻3小时取出，解冻后；在-0℃的温度下冷冻3小时取出，解冻后；在10℃下静置3小时取出，冷却后；在在20℃下静置3小时取出，冷却后；在35℃下静置3小时取出，冷却，得到溶液b；

（5）在4℃条件下，向溶液b中缓慢加入15％（m／v）PEG8000，持续搅拌30min，然后在4℃下，以转速为8000r·min－1高速离心20min，弃上清，得蛋白质沉淀物；

（6）将沉淀物用PH6.5的Na-K缓冲液溶解，装入预处理好的透析袋中，于4℃条件下透析6h，每2h更换一次透析液，将透析处理过的蛋白质溶液进行冻干处理。