[发明专利]长链非编码RNA AFAP1-AS1在制备乳腺癌辅助诊断及预后判断制剂上的应用

说明书

本发明公开了一种长链非编码RNA AFAP1‑AS1在制备乳腺癌辅助诊断及预后判断制剂上的应用。该长链非编码RNA可以用于制备乳腺癌患者的辅助诊断及预后判断制剂，特别是制备出原位杂交检测法预测乳腺癌患者预后的试剂盒。通过研究证实AFAP1‑AS1在乳腺癌组织中表达上调，高表达AFAP1‑AS1的乳腺癌患者比低表达AFAP1‑AS1的乳腺癌患者预后差，因此，将AFAP1‑AS1的表达用于乳腺癌患者的预后预测，可以为乳腺癌患者的预后提供强有力的分子生物学依据，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及长链非编码RNA AFAP1-AS1的原位杂交探针、检测试剂及其应用方法。

背景技术

人类基因组计划及其后续的DNA元件百科全书计划(The Encyclopedia of DNAElements Project,ENCODE)研究成果表明，蛋白编码基因序列仅占人类基因组序列的1-3％，而人基因组中绝大部分可转录的序列为长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)。LncRNA广泛地存在于各种生物中，且随着生物复杂程度的升高，基因组中lncRNA序列的比例也相应地增大，提示lncRNA在生物进化过程中有重要意义。随着lncRNA不断被发现，它们的功能逐渐被诠释，科学家们发现lncRNA广泛而活跃地参与到生命活动不同层面的功能调控中，作为一个崭新的领域，已经成为国际生命科学研究领域新的前沿与热点。

LncRNA可作为功能蛋白质的信号(signal)、诱导(guide)、诱饵(decoy)或支架(scaffold)分子等多种方式，在染色质重构、基因转录、翻译及蛋白修饰等多重水平调控基因的表达，并在包括发育、免疫、生殖等基本生理过程中扮演了不可替代的角色，更重要的是，lncRNA的表达与功能失调已经与包括恶性肿瘤在内的人类多种疾病紧密联系在了一起。因此，深入研究lncRNA的功能，揭示由lncRNA介导的遗传信息传递方式和表达调控网络，不仅可以从蛋白编码基因以外的角度重新注释和阐明基因组的结构与功能，深入发现生命活动的本质和规律，还有望从一个新的视角认识包括肿瘤在内的多种人类常见疾病的发病机理，并为这些疾病的诊断与治疗提供新的分子标志物与治疗靶点。

乳腺癌的发病率居女性恶性肿瘤的第一位，自20世纪70年代末开始其发病率一直呈上升趋势，美国8名妇女一生中就会有1人患乳腺癌，而我国乳腺癌发病率近年来也一直持续增长，已成为当前社会的重大公共卫生问题，乳腺癌容易发生转移，晚期患者预后较差。研究表明，这种肿瘤的发生发展是多基因参与、多步骤、多阶段的复杂过程，LncRNA在乳腺癌的发生发展过程中可能也起到了重要的作用。最近我们利用lncRNA芯片，构建了乳腺癌活检组织及正常对照样品中lncRNA的表达谱，从中筛选了一些在乳腺癌中差异表达的lncRNAs，经扩大样本实时荧光定量PCR验证，证实lncRNA AFAP1-AS1(NCBI accessionnumber:NR_026892)在乳腺癌中表达显著上调，针对该lncRNA的检测制剂可以用于乳腺癌的辅助诊断。随后，我们进一步增加样本，在77例有临床随访资料的乳腺癌石蜡存档标本中，通过原位杂交(in situ hybridization)的方法检测了AFAP1-AS1的表达水平，发现AFAP1-AS1表达高的患者更容易发生转移，其生存时间短于该lncRNA表达低的患者，因此针对该lncRNA的检测制剂也可以用于乳腺癌的预后判断。

发明内容

本发明的目的是提供长链非编码RNA AFAP1-AS1的原位杂交探针、试剂及其应用方法，利用长链非编码RNA AFAP1-AS1序列可以制备用于乳腺癌辅助诊断及预后判断的制剂。

LncRNA AFAP1-AS1的应用方法，用于制备乳腺癌疗效预测的制剂，该长链非编码RNA AFAP1-AS1的序列如SEQ NO:1所示。

所述的乳腺癌疗效预测的制剂为原位杂交检测试剂。