[发明专利]一种试剂盒在利用高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素中的应用

说明书

技术领域

本发明属于血液检测技术领域，具体涉及高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的试剂盒。

背景技术

类固醇激素是一类脂溶性小分子激素，是由胆固醇经一系列酶催化而来。本发明主要针对其中对人体生长发育、性成熟及新陈代谢所必须的10种类固醇激素进行分析，包括脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)、睾酮(testosterone，T)、双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)、雄烯二酮(androstenedione,AD)、雌酮(estrone,E1)、皮质酮(corticosterone,CORT)、孕酮(progesterone,P4)、孕烯醇酮(pregnenolone,P5)、17α-羟孕酮(17α-Hydroxyprogesterone,17α-OHP4)和17-羟孕烯醇酮(17-hydroxyl pregnenolone,17-OHP5)。

其中，DHEA是一种非常重要的荷尔蒙，可使人改善记忆力，恢复性能力，降低血液中的胆固醇，并能抵抗肥胖、心脏疾病与压力，还能强化免疫系统。脱氢表雄酮过低可能引起糖尿病、免疫力不足、癌症、高血压及心脏病等重大疾病。17α-OHP4和CORT增高可能引起先天性肾上腺皮质增生，肾上腺腺瘤或卵巢肿瘤。T可增进记忆力、增加肌肉强度、减少脂肪、增加骨头硬度。DHT的作用主要是维持产生精子作用，刺激生殖器官的发育，维持正常的性欲，同时还能促进骨骼生长与钙磷的沉积和红细胞的生成。AD升高可引起痤疮，先天性肾上腺皮质增生，肾上腺皮质肿瘤等；AD降低可使得男性发育延迟，侏儒症，肾上腺皮质功能减退症，镰状红细胞性贫血。

总之，人体类固醇激素的升高或者降低与一些临床疾病如先天性肾上腺增生、多囊卵巢综合症、肾上腺皮质功能不全等疾病息息相关，其在血清中含量的高低对于评估人体健康是至关重要的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的试剂盒，

所述的10种类固醇激素分别为：脱氢表雄酮、睾酮、双氢睾酮、雄烯二酮、雌酮、皮质酮、孕酮、孕烯醇酮、17α-羟孕酮和17-羟孕烯醇酮；

所述试剂盒包括如下试剂：

(1)洗脱液：

洗脱液A：0.1％v/v甲酸水溶液；

洗脱液B：0.1％v/v甲酸甲醇溶液；

(2)标准品母液：含雄烯二酮、17α-羟孕酮、孕烯醇酮、雌酮、双氢睾酮、脱氢表雄酮、孕酮、睾酮、皮质酮和17-羟孕烯醇酮的甲醇溶液；

(3)混合内标液：含有d6-脱氢表雄酮、d3-睾酮、d8-17α-羟孕酮、d2-雌酮和d9-孕酮的甲基叔丁基醚溶液；

(4)稀释液：

稀释液1：空白血清基质溶液；

稀释液2：甲醇；

(5)萃取液：甲基叔丁基醚；

(6)质控品：含有雄烯二酮、17α-羟孕酮、孕烯醇酮、雌酮、双氢睾酮、脱氢表雄酮、孕酮、睾酮、皮质酮和17-羟孕烯醇酮的空白血清基质溶液，分高中低三个浓度分别为QC(L)、QC(M)、QC(H)；

其中，QC(L)，QC(M)，QC(H)中10种类固醇激素质控品对应浓度见表1；

表1 10种类固醇激素质控品对应浓度(单位ng/mL)

其中，所述的标准品母液为含浓度为20ng/mL的雄烯二酮、20ng/mL 17α-羟孕酮、20ng/mL孕烯醇酮、20ng/mL雌酮、20ng/mL双氢睾酮、80ng/mL的脱氢表雄酮、100ng/mL孕酮、100ng/mL睾酮、100ng/mL皮质酮、50ng/mL17-羟孕烯醇酮的甲醇溶液。

其中，所述的混合内标液为含有1.0mg/mL d6-脱氢表雄酮、1.0mg/mL d3-睾酮、1.0mg/mL d8-17α-羟孕酮、1.0mg/mL d2-雌酮和1.0mg/mL d9-孕酮的甲基叔丁基醚溶液。

其中，所述的空白血清基质溶液为40mg/mL牛血清蛋白的水溶液。

其中，所述的血清为人或动物的血清。

上述高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的试剂盒的制备方法，