[发明专利]一株诺氟沙星降解乙酸钙不动杆菌NOR‑36及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物高科技技术领域，具体涉及一株诺氟沙星降解乙酸钙不动杆菌NOR-36及其应用。

背景技术

兽用抗生素是指以亚治疗剂量用于动物饲料中，以保障动物健康、或促进动物生长与生产、提高饲料利用率的抗生素。抗生素本身对人体是无害的，但如果过量使用将使病源细菌产生耐药性，导致抗生素对其失效。抗生素的过量使用使药物耐药性、畜产品药物残留等都成为了不可忽视的严重问题，尤其是破坏动物的免疫机能。同时抗生素属于难生物降解物质，一旦造成抗生素污染，很容易在环境中富集，诱导耐药菌株产生，对环境微生态造成严重的影响。

氟喹诺酮类药物在我国畜牧水产养殖业中已广泛应用，但在使用中发现，氟喹诺酮类药物会产生一系列的不良反应，如皮肤过敏反应及光敏反应、软骨毒性、循环系统反应、中枢神经系统(CNS)反应、胃肠道反应等，直接影响了畜牧和水产养殖业的发展。诺氟沙星是当前广泛应用于临床的第三代喹诺酮抗生素(氟喹诺酮类)的代表药物之一。由于诺氟沙星的喹诺酮环的稳定性和抗水解能力使其成为持久性污染物,目前已多次在水体中被检测出来。微生物降解具有成本低、效率高、无二次污染、生态恢复性好等优点，已在很多方面得到应用，所以筛选出诺氟沙星降解菌对于处理诺氟沙星生产废水具有重大意义。

发明内容

本发明的目的在于针对生产实践中的实际问题和需求，利用微生物的方法来降解废水中的污染物，适用于现代废水处理工艺，使废水达标排放，同时降低生产和使用成本。

本发明提供一种消除诺氟沙星残留的降解菌，其菌株NOR-36是一株革兰氏染色反应阴性菌，于2015年2月9日保藏于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），保藏编号CGMCC NO.10540，经鉴定是乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter.calcoaceticus）。生物学特性为革兰氏染色阴性，菌落光滑，短杆状，接触氧化酶阳性，硝酸盐还原酶阴性。本发明提供了甲基杆菌NOR-36在诺氟沙星降解中的应用。在实验室摇瓶培养条件下使浓度为500ug/L的诺氟沙星降解率达90％以上。该菌可以用发酵工业通用发酵设备进行生产。

本发明提供了含有所述乙酸钙不动杆菌NOR-36的菌剂。

本发明还提供了所述乙酸钙不动杆菌NOR-36生产菌剂的方法。

所述乙酸钙不动杆菌NOR-36生产菌剂的方法，包括：斜面种－摇瓶种－种子罐－生产罐－产品，所述产品的包装剂型为液体菌剂或固体吸附菌剂。

所述生产菌剂的方法，具体为：

1） 将诺氟沙星残留的乙酸钙不动杆菌NOR-36的试管种接种于添加哌嗪的LB培养基中，振荡培养至对数期；

2） 将步骤1）培养好的菌种按10％的接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，即种子液；

3） 将步骤2）所述种子液按10％的接种量接入生产罐进行发酵培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同，发酵完成后的培养液即为菌剂；

4） 步骤3）所述菌剂直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂型，或采用泥炭吸附用包装袋分装成固体菌剂剂型。

步骤1）中所述的LB培养基配方为：NaCl 10.00g/L,蛋白胨10.00g/L,酵母粉5.00g/L,哌嗪5g/L，pH7.0。

步骤2）所述的种子罐所用的培养基配方为：哌嗪5g/L，葡萄糖8g/L，（NH₄）₂SO₄ 1g/L，K₂HPO₄ 2g/L，MgSO₄ 0.5g/L，NaCl 1g/L%，CaCO₃ 0.5g/L，酵母膏2g/L，pH值7.2-7.5。

步骤2）所述种子罐和步骤3）所述的生产罐的培养过程中，无菌空气的通气量为1：0.6-1.2，搅拌速度为180-240转/分，培养温度为30-35℃，步骤2和3的整个工艺流程培养时间为48-60小时。

所述菌剂在诺氟沙星降解中的应用。