[发明专利]丁酰基梧桐素在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及丁酰基梧桐素在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

丁酰基梧桐素（Butyrylmallotolerin），黄色针晶，mp197-198℃，主要存在于大戟科(Euphorbiaceae) 野梧桐 Mallotus japonicus Muell.Arg.果皮中，分子式：C₂₂H₂₄O₉，分子量：432.43，结构式为

现代药理研究表明，丁酰基梧桐素具有细胞毒作用。对HeLa细胞的ID50为342ng/mL，对KB细胞的ED50为0.95μg/mL，对L5178Y细胞株的ED50为0.82μg/mL。对Hep-2、PC-13、B16、L5178Y、P388细胞的IC50(μg/mL)依次为0.91、63、2.38、27、1.22。丁酰基梧桐素还具有抗病毒作用。抑制单疱病毒HSV-1的复制，其ED50为196ng/mL。

通过文献检索， 国内尚未见丁酰基梧桐素用于制备抗肿瘤药物。

发明内容

为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，应用丁酰基梧桐素制备抗肿瘤药物。

本发明的技术方案如下：

本发明所述的丁酰基梧桐素，其制备方法包括以下步骤：

（1）取野梧桐的果皮粉碎，按固液体积比为5：1.5-2加入夹带剂，在压力22-35MPa，温度35-48℃条件下，通入液态CO₂萃取90-180min，在压力7-9MPa，温度30-35℃条件下解析，收集萃取液；

（2）将步骤（1）中得到的萃取液加硅藻土搅拌脱色，过滤得到脱色液；

（3）将步骤（2）中得到的脱色液浓缩至相对密度为1.12，上中性氧化铝柱，用石油醚-乙酸乙酯洗脱纯化，得到丁酰基梧桐素粗品；

（4）粗品经过制备型高效液相色谱精制得到高纯度的丁酰基梧桐素。

所述步骤（1）中，夹带剂为甲醇或乙醇溶液。

所述步骤（2）中，硅藻土加入量为药材量的3-4.5%

所述步骤（3）中，石油醚-乙酸乙酯的体积比为3:14。

所述步骤（4）中，制备型高效液相色谱流动相为甲醇-乙腈-水，体积比为19:38:45。

丁酰基梧桐素在制备抗肿瘤药物中的应用。

通过体外肿瘤细胞体外抑制试验，观察丁酰基梧桐素的抗肿瘤作用，结果表明丁酰基梧桐素对A549肺癌和HT29结肠癌均有一定的抑制作用，具有显著抗癌活性，且其毒副作用小。

本发明的有益效果通过以下实验得到了验证：

实验方法：

1、受试提取物：丁酰基梧桐素提取物

（1）性状：结晶，味苦。

（2）规格：含丁酰基梧桐素≥90%。

（3）溶剂：乙醇或甲醇。

（4）储存条件：4℃，密封保存。

2、细胞株：肺癌细胞株A549、结肠癌细胞株HT29。

3、给药剂量和方法

丁酰基梧桐素组：10mg/kg/天，灌胃给药，隔一天一次，共五天。

阴性对照组：10mg/kg/天，生理盐水肌注给药，隔一天一次，共五天。

阳性对照组：30mg/kg/天，5-氟尿嘧啶肌注给药，隔一天一次，共五天。

灌胃后2h，用HPLC检测血浆药物浓度。

4、种植瘤模型的建立与给药

（1）皮下种植：分别将上述细胞培养至90%融合，收集细胞，取2×10 ⁶细胞悬液，注射至小鼠肋下皮下组织，于术后15天取材，称量瘤重。另取同样模型，观察30天，计算药物对模型动物存活率的影响。

（2）肺内种植瘤肺转移模型：取2×10 ⁶细胞悬液注射至小鼠肺包膜内，于术后15天取肺，测量瘤重和肺转移数。

（3）给药方式：种植瘤细胞同时给药。

5、结果

结果如表1、表2和表3显示，丁酰基梧桐素组用药均有不同程度的抑制肿瘤生长和转移的作用，可延长实验小鼠的生存期。

表1  丁酰基梧桐素对种植瘤的抑制作用（n=20，±S）

表2  丁酰基梧桐素对肿瘤转移发生率的影响（n=20，%）