[发明专利]一种兔儿伞总黄酮的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种兔儿伞总黄酮的提取方法，尤其涉及一种利用生物酶协同超声波提取兔儿伞总黄酮的方法。

背景技术

 兔儿伞为菊科兔儿伞属多年生草本植物，其幼苗嫩叶均可食用，根和全草均可入药，既有药用价值又有经济价值。兔儿伞治疗风湿麻木、关节疼痛、痈疽疮肿、跌打损伤、月经失调等症效果显著，是我国民间习用药材之一。兔儿伞中黄酮类化合物及生物碱含量较高，经研究表明，兔儿伞总黄酮具有显著的抗炎、镇痛及消肿的作用。

目前关于兔儿伞总黄酮的提取的专利和文献较少，通常采用溶剂萃取法、或微波提取法等，其工艺复杂、收率低并采用多种溶剂，生产成本高。如文献“兔儿伞总黄酮的微波提取工艺”（作者，吴素珍、李加林等），取兔儿伞干燥粉末直接置于微波反应釜，以乙醇为溶剂的条件下提取10min，其得率达到11%，但微波产能较高，易破坏热不稳定成分，从而影响兔儿伞总黄酮的提取。

本发明利用酶解破坏细胞壁和超声波的空化效应，在低温下即可得到高的提取率，为热不稳定物质的提取提供了一种新的强化方法。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种兔儿伞总黄酮的提取方法，该方法具有工艺简单、易操作、提取时间短、提取率高、对环境友好的优点。

本发明包括以下步骤：

a.将兔儿伞烘干，粉碎，过20目筛；

b.向上述原料中加入1~2倍的蒸馏水，再加入原料重量2~5%的生物酶，控温在45~55℃，搅拌，酶解时间为2~3h；

c.将酶转化后的物料再加入6~8倍的60~70%的乙醇，置于频率为40KHz的超声波提取器中，于60~70℃的条件下提取2~4h，离心，取出上清液；

d.将步骤c中的上清液浓缩后，上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用5~7BV的50~70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得兔儿伞总黄酮。

步骤b中所述的生物酶为质量比2:1的纤维素酶和半纤维素酶的混合物。

步骤d中所述的大孔吸附树脂型号为NKA-9、H1020、D-101中的任意一种。

本发明选用生物酶（纤维素酶和半纤维素酶为主体的复合酶）在适宜温度下酶解兔儿伞。由于纤维素酶和半纤维素酶能水解结构致密的植物细胞壁，使其疏松、膨胀、崩溃，从而增大了有效成分的扩散面积，减小了阻力，提高了有效成分的得率。再结合超声波的空化效应，加剧运动，使胞外液容易进入细胞内，溶解并释放胞内产物，具有强力、瞬时、高效的特点。该方法工艺简单、成本低、萃取效率高、对环境友好，同时也保证了兔儿伞总黄酮的生物活性。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将兔儿伞烘干，粉碎，过20目筛；向上述原料中加入1倍的蒸馏水，再加入原料重量2%的生物酶（纤维素酶与半纤维素酶的质量比为2:1），控温在45℃，搅拌，酶解时间为2h；将酶转化后的物料再加入6倍的60%的乙醇，置于频率为40KHz的超声波提取器中，于60℃的条件下提取2h，离心，取出上清液，浓缩后，上D-101大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用5BV的50%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得兔儿伞总黄酮，其得率为12.8%，经UV检测，总黄酮含量为93.4%。

实施例2：

将兔儿伞烘干，粉碎，过20目筛；向上述原料中加入2倍的蒸馏水，再加入原料重量4%的生物酶（纤维素酶与半纤维素酶的质量比为2:1），控温在50℃，搅拌，酶解时间为3h；将酶转化后的物料再加入7倍的65%的乙醇，置于频率为40KHz的超声波提取器中，于65℃的条件下提取3h，离心，取出上清液，浓缩后，上NKA-9大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用6BV的60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得兔儿伞总黄酮，其得率为14.1%，经UV检测，总黄酮含量为95.8%。

实施例3：

将兔儿伞烘干，粉碎，过20目筛；向上述原料中加入2倍的蒸馏水，再加入原料重量5%的生物酶（纤维素酶与半纤维素酶的质量比为2:1），控温在55℃，搅拌，酶解时间为4h；将酶转化后的物料再加入8倍的70%的乙醇，置于频率为40KHz的超声波提取器中，于70℃的条件下提取4h，离心，取出上清液，浓缩后，上H1020大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用7BV的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得兔儿伞总黄酮，其得率为14.2%，经UV检测，总黄酮含量为90.2%。