[发明专利]一种测定蓝藻伪空胞和群体细胞间空隙浮力贡献的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定蓝藻伪空胞和群体细胞间空隙分别在藻细胞上浮过程中浮力贡献的方法，具体是一种测定蓝藻伪空胞和群体细胞间空隙浮力贡献的方法。

背景技术

蓝藻水华已经成为湖库面临的严重环境问题之一，蓝藻水华的形成机制分为越冬、复苏、生物量增加，聚集等过程。在复苏过程中，伪空胞被认为是藻细胞复苏的浮力提供因子，但是申请人的最近研究结果发现，蓝藻群体细胞间空隙也可以为藻群体提供浮力，而且藻群体细胞间空隙极有可能是藻群体上浮的关键性因子，这一研究成果尚属首次报道。如何区分伪空胞和群体细胞间空隙分别对藻细胞上浮的贡献更是未见报道？因此急需探索能够测量群体细胞间空隙的大小的方法，并在此基础上分析伪空胞和全体细胞间空隙分别为藻细胞提供浮力的贡献。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定蓝藻伪空胞和群体细胞间空隙分别在藻细胞上浮过程中浮力贡献的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种测定蓝藻伪空胞和群体细胞间空隙浮力贡献的方法，其具体的方法为：

(1)在野外湖库取1000ml湖库水体，经过0.45um玻璃纤维膜过滤，将蓝藻细胞去除，所得不含蓝藻细胞的水体，待用；

(2)在野外选取10ml蓝藻水华样品A；

(3)取1ml蓝藻水华样品A加入到99ml不含蓝藻细胞的水体，得混合液B；

(4)将混合液B置于频率为45hz超声波中处理5min，得混合液C；

(5)利用电子显微镜对混合液C进行观测，蓝藻呈单细胞形态存在，对混合液C中的藻细胞密度进行计数，计算混合液C中藻细胞密度S；

(6)取1ml混合液C，利用气体监测装置，监测样品中伪空胞气体含量，所得伪空胞气体含量，记为V₀₁；

(7)计算平均每个藻细胞中伪空胞的气体含量：V₁＝V₀₁/S；

(8)根据平均每个藻细胞的伪空胞气体含量，计算平均每个藻细胞中的伪空胞产生的浮力：F₁＝ρgV₁；

(9)取1ml未经任何处理的蓝藻水华样品A，利用气体监测装置，测定群体中伪空胞和群体细胞间空隙中气体总含量V₀₂；

(10)计算平均每个藻细胞中伪空胞和群体细胞间空隙的气体含量：V₂＝V₀₂/S；

(11)群体细胞间空隙气体V₃＝V₂-V₁；

(12)每个藻细胞的群体细胞间空隙气体含量份额产生的浮力F₃＝ρgV₃；

(13)对比F₁和F₃即可计算出伪空胞和群体细胞间空隙分别在藻华复苏过程产生浮力的贡献。

作为本发明进一步的方案：所述混合液C中藻细胞按照“伪空胞提纯方法”进行提取伪空胞，检验伪空胞的完整性。

作为本发明进一步的方案：所述“伪空胞提纯方法”为：选取10ml混合液C，加入Mg²⁺和青霉素G，使之最终浓度分别为1mM和250u L-1，静置培养6小时，用300×g离心办法收集微囊藻细胞至装有1M甘油的试管中，轻摇试管10min，使蓝藻细胞和甘油充分混合；用三倍体积0.02M、pH7.7Tris-Cl进行渗透冲击，使细胞裂解并在4℃冰箱内放置4小时，然后将裂解液以300×g离心过夜后收集液面的淡蓝绿色层，收集液通过GF/C滤膜进行过滤，所得滤液在2×30cm的Sepharose 4B柱上进行凝胶过滤，随后用0.01M、pH7.5Tris-Cl溶液洗脱，得乳白色洗脱液，以300×g离心6小时，收集液面白色漂浮状的伪空胞提取液于Eppendorf管4℃冰箱保存，用于电镜观察。

作为本发明进一步的方案：所述气体监测装置由压力套管、毛细压力管、磨口塞、压力套管塞和刻度管，所述压力套管的内部设有毛细压力管，且毛细压力管的尾部设有磨口塞，而压力套管的尾部设有压力套管塞，其中毛细压力管的前段设有刻度管。

作为本发明进一步的方案：所述压力套管置于水浴箱内，所述压力套管的前端通过进气排气装置、气压计连接氮气罐。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明能够准确的测定处蓝藻伪空胞和群体细胞间空隙分别在藻细胞上浮过程中浮力贡献，且本发明方法简单，检测精度高。

附图说明