[发明专利]一种测定硫酸卡那霉素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及硫酸卡那霉素的测定方法，特别是利用四羧基锌酞菁测定硫酸卡那霉素的共振散射光谱法。

背景技术

硫酸卡那霉素(Kanamycin Sulfate, KANA) 是一种氨基糖苷类广谱抗生素，主要对革兰阴性菌如大肠埃希菌、变形杆菌属、肺炎杆菌等引起的严重感染有疗效，也可作为第二线药物对结核病进行治疗，是临床上重要的抗感染药物。但抗生素的滥用会造成严重的不良后果，临床上对于抗生素的使用剂量需严格控制，因此，对卡那霉素的定量测定具有非常重要的意义。常用于卡那霉素的测定方法有微生物法、高效液相色谱法、分光光度法、旋光法、比色法、电化学法、共振散射光谱法等。其中共振散射光谱法具有操作简便、灵敏度高、选择性好、分析快速等优点，近年来已在药物分析中有一些应用。四羧基锌酞菁（ZnC₄Pc）结构类似于卟啉，在弱酸性溶液中可以与硫酸卡那霉素通过静电引力作用形成离子缔合物，使体系的共振散射强度增大，据此建立的共振散射光谱法测定硫酸卡那霉素的方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用四羧基锌酞菁测定硫酸卡那霉素的共振散射光谱法。

具体步骤为：

在6支10mL比色管中分别加入0.0、0.1、0.5、0.8、1.0、1.2mL 10.0μg/mL硫酸卡那霉素溶液，再在每支比色管中加入0.3～1.5mL pH6.0的伯瑞坦-罗比森(Britton-Robinson,B-R)缓冲溶液和0.5～2.0mL 2.0×10^-5mol/L四羧基锌酞菁溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀，室温下反应10分钟后，用1cm石英比色皿于荧光光度计上以λex=λem的方式扫描共振散射光谱；在332nm处分别测定加有硫酸卡那霉素的溶液的共振散射强度I_332nm和不加硫酸卡那霉素的试剂空白溶液的共振散射强度I₀，计算差值ΔI_332nm =I_332nm-I₀，差值ΔI_332nm与硫酸卡那霉素浓度C在0.1～1.2μg/mL范围内成线性关系，线性回归方程为ΔI_332nm =19.43 C-2.201，相关系数0.9922，检出限0.029μg/mL；另取硫酸卡那霉素滴眼液或硫酸卡那霉素注射液，用水稀释得到浓度为400μg/mL的溶液；再将该溶液稀释得到10μg/mL的待测液；取1～3 mL待测液，同法测定共振散射强度，计算出硫酸卡那霉素滴眼液或注射液中硫酸卡那霉素的含量。

本发明测定方法灵敏度高、选择性好、简便、快捷。

附图说明

图1为本发明实施例空白与1μg/mL硫酸卡那霉素的共振散射光谱图。

图中标记：a：空白；b：空白+1μg/mL KANA。

具体实施方式

实施例：

在6支10mL比色管中分别加入0.0、0.1、0.5、0.8、1.0、1.2mL 10.0μg/mL硫酸卡那霉素溶液，再在每支比色管中加入1.0mL pH6.0的伯瑞坦-罗比森缓冲溶液和1.3mL 2.0×10^-5mol/L四羧基锌酞菁溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀，室温下反应10分钟后，用1cm石英比色皿于荧光光度计上以λex=λem的方式扫描共振散射光谱；在332nm处分别测定加有硫酸卡那霉素的溶液的共振散射强度I_332nm和不加硫酸卡那霉素的试剂空白溶液的共振散射强度I₀，计算差值ΔI_332nm =I_332nm-I₀，差值ΔI_332nm与硫酸卡那霉素浓度C在0.1～1.2μg/mL范围内成线性关系，线性回归方程为ΔI_332nm =19.43C-2.201，相关系数0.9922，检出限0.029μg/mL；另取硫酸卡那霉素滴眼液8mL放入100mL容量瓶中或硫酸卡那霉素注射液1mL放入250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。然后各取2.5mL上述溶液分别放入100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为待测液。分别取1mL上述待测液同法测定共振散射强度值，并进行回收率实验，结果见表1。

硫酸卡那霉素样品测定结果（n=5）

样品测定值(g/L)标示量(g/L)回收率( %)RSD(%)滴眼液4.985108.31.1注射液243.0250104.30.25