[发明专利]一种基于酶催化反应测定过氧化氢的方法

说明书

技术领域

本发明涉及过氧化氢的测定方法，特别是基于酶催化反应测定过氧化氢的共振散射光谱法。

背景技术

过氧化氢是一种强氧化剂，可用做消毒剂、漂白剂、杀菌剂、脱氧剂等，广泛用于食品、纺织、造纸、医药、化工、环保、电子等领域。过氧化氢与人类健康密切相关，长期接触过氧化氢会出现呼吸道及皮肤刺激等症状，空气中过氧化氢含量不得超过1.4mg/m³。另一方面，过氧化氢是酸雨形成的主要原因之一。因此，过氧化氢的测定在环境、化学、医学、生物科学等领域都具有十分重要的意义。目前测定H₂O₂的方法主要有分光光度法、荧光法、色谱法、化学发光法、电化学法、共振散射光谱法和滴定法等。共振散射光谱法因具有简便快速、灵敏度高、检出限低等特点，近年来已用于痕量分析。而将酶催化反应与共振散射光谱法相结合可进一步提高方法的灵敏度。牛血红蛋白（Hb）具有过氧化物模拟酶的性质，它可催化H₂O₂氧化过量I^-生成I₃^-，I₃^-会阻碍纳米银之间的聚集，使体系的共振散射强度降低，根据反应前后纳米银聚集状态改变而引起体系共振散射强度的变化可建立定量测定H₂O₂的方法，此方法目前尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于酶催化反应测定过氧化氢的共振散射光谱法。

具体步骤为：

在12支10mL比色管中都加入0.0～2.0mL pH=4.2克拉克-鲁布斯（Clark-Lubs， C-L） 缓冲溶液、0.1～1.5mL 0.05mol/L碘化钾(KI)溶液和0.0～1.2mL 2.0×10^-6 mol/L牛血红蛋白(Hb)溶液，然后在12支比色管中分别加入0.0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL 6.40×10^-5mol/L过氧化氢溶液，于室温下放置20分钟后，再在每支比色管中都加入0.1～0.7mL 2.38×10^-4mol/L纳米银即AgNPs溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀，继续反应10分钟后，用1cm石英比色皿于荧光分光光度计上以λex=λem的方式扫描共振散射光谱。在430nm波长处分别测定加有过氧化氢溶液的共振散射强度I_430nm和不加过氧化氢的试剂空白溶液的共振散射强度I₀，计算共振散射强度的差值ΔI_430nm =I₀-I_430nm，其共振散射强度的差值ΔI_430nm与过氧化氢浓度C在3.20×10^-8～2.24×10^-5 mol/L范围内成线性关系，线性回归方程为△I=2.992×10⁷c+37.82，相关系数0.9971，检出限2.20×10^-8mol/L；另取池塘水或新鲜雨水过滤，取2 mL滤液同法测定共振散射强度值，计算出池塘水或新鲜雨水中过氧化氢的含量。

本发明测定方法选择性好、灵敏度高。

附图说明

图1为本发明实施例空白与9.6×10^-6mol/L过氧化氢的共振散射光谱图；

图中标记：a：空白；b：pH4.2 C-L缓冲液- 0.005mol/LKI – 4.0×10^-7mol/LHb – 9.6×10^-6 mol/L H₂O₂-AgNPs。

具体实施方式

实施例：