[发明专利]一种化工废水中内分泌干扰遗传毒性试验识别方法

权利要求书

1.一种化工废水中内分泌干扰遗传毒性试验识别方法，其步骤包括：

(1)选择受试物：筛选处于妊娠期的携带xy1E的转基因健康母鼠作为试验对象，并对转基因母鼠进行繁殖建系；

(2)配置内分泌干扰液：提取化工废水中内分泌干扰物并与自来水充分混合，内分泌干扰物的浓度比例为1.0％-3.0％；

(3)对受试体进行染毒处理：将转基因母鼠充分暴露在内分泌干扰液环境下，存活1-3天；

(4)提取细胞：提取转基因母鼠体内细胞以及胚胎细胞，分别置于细胞悬浮液中，待检测；

(5)细胞的检测：采用单细胞分子电泳技术，对细胞悬浮液中的母体细胞以及胚胎细胞进行检测，分析其DNA损伤程度，并绘制彗星尾图谱，对试验结果进行分析。

2.根据权利要求1所述的一种化工废水中内分泌干扰遗传毒性试验识别方法，其特征在于：所述的转基因母鼠，是以穿梭质粒pESnx为载体，将xy1E诱变靶基因植入母鼠体内；之所以选择处于妊娠期的母鼠，是为了进一步说明遗传毒性对于生物及其后代的影响。

3.根据权利要求1所述的一种化工废水中内分泌干扰遗传毒性试验识别方法，其特征在于：所述的细胞悬浮液的配置方法为：

(1)先制备小鼠细胞培养液，成分为：微量元素、促生长因子、无机盐、维生素和小鼠血浆等；

(2)将母鼠体内细胞及胚胎细胞先剪碎，然后用分解酶处理成单个细胞；

(3)然后把这些单个细胞放入小鼠细胞培养液中；

(4)调节培养液的pH值为6.9，并放入适宜的环境下培养即可。

4.根据权利要求1所述的一种化工废水中内分泌干扰遗传毒性试验识别方法，其特征在于：所述的单细胞分子电泳技术可以快速检测单细胞DNA的损伤，根据绘制的彗星尾图谱，可以检测到每1.903×10^-41kg中0.09个DNA的断裂。