[发明专利]一种褐藻胶寡糖脂质体的制备方法

说明书

技术领域

    本发明涉及脂质体领域，具体是一种褐藻胶寡糖脂质体的制备方法。

背景技术

    褐藻酸寡糖(alginate oligosaccharides，AOS)主要是通过采用化学或是生物方法降解褐藻胶得到的，它是由是 2~10 个 α-L-古洛糖醛酸(G)或者其 C5 差向异构体β-D-甘露糖醛酸(M)通过β-1，4 糖苷键连接而成的糖链。褐藻胶寡糖有很多功能：抗肿瘤，褐藻胶寡糖对非特异性免疫或特异性免疫系统具有良好的激活和促进作用，能激活巨噬细胞，激活后具有细胞毒作用，可抑制肿瘤细胞增殖从而杀死肿瘤；抗凝血作用，褐藻胶寡糖保持了良好的抗凝活性，又有较小的副作用；降血糖血脂作用，合适剂量的褐藻胶寡糖能较好地防止高胆固醇血症的形成，有降脂、维护心血管正常功能的作用；免疫调节活性作用等。但是褐藻胶寡糖的价格较为昂贵，因此提高褐藻胶寡糖的生物利用度尤为重要。

脂质体作为一种新型药物载体，有利于增强药物的靶向性，提高药物的生物利用度，增加药物的稳定性，降低药物的毒副作用，达到药物控释缓释的目的。纳米脂质体的制备方法主要有薄膜分散法、乙醇注入法、逆向蒸发法、冻融法等。

发明内容

    本发明的目的是通过逆相蒸发法制备得到褐藻胶寡糖脂质体，本发明制备的褐藻胶寡糖脂质体稳定而均匀，生物利用度高，可用于食品、保健品、药品、饲料、添加剂等。

本发明所采用的技术方案是：

一种褐藻胶寡糖脂质体的制备方法，包括如下步骤：

步骤一、称取一定量的胆固醇和大豆卵磷脂于小烧杯中，溶解于有机溶剂中；

步骤二、用PBS配制褐藻胶寡糖溶液，然后倒入配制好的有机溶剂中，磁力搅拌，超声，再磁力搅拌，旋转蒸发，使有机溶剂全部挥发，在圆底烧瓶底部形成均匀的薄膜；

步骤三、用PBS溶液定容洗膜，再加入一定量的吐温-80制备得到褐藻胶寡糖脂质体，将溶解后的液体超声并置于4℃冰箱保存备用。

进一步的，备得到的褐藻胶寡糖脂质体的组分为：褐藻胶寡糖，卵磷脂，胆固醇，吐温，其余为PBS。

进一步的，所述有机溶剂是氯仿和乙醚，其体积比为2:3。

进一步的，所述胆固醇和大豆卵磷脂重量比为4.5:1。

进一步的，所述褐藻胶寡糖的浓度为8.5mg/mL。

进一步的，外内水相之比为5:1。

本发明的有益效果是：应用本发明制备的脂质体，质量稳定，脂质体均匀，分布范围窄，褐藻胶寡糖的包封率为66.07%，粒径为338.2nm，制备的脂质体储藏稳定性好。本发明利用逆相蒸发法来制备褐藻胶寡糖脂质体，包封率比较高，稳定性比较强。

附图说明

图1是制备褐藻胶寡糖脂质体的方法流程图。

图2是葡萄糖含量对吸光度的标准曲线图。

图3是脂胆比对褐藻胶寡糖脂质体制备的包封率影响图；

图4是褐藻胶寡糖浓度对褐藻胶寡糖脂质体制备的包封率影响图；

图5是吐温含量对褐藻胶寡糖脂质体制备的包封率影响图；

图6是外内水相之比对褐藻胶寡糖脂质体制备的包封率影响图；

图7是脂胆比与外内水相之比交互作用的响应面示意图；

图8是脂胆比与吐温交互作用的响应面示意图；

图9是褐藻胶寡糖浓度与外内水相之比交互作用的响应面示意图；

图10是吐温与外内水相之比交互作用的响应面示意图；

图11是褐藻胶寡糖脂质体14天的释放率示意图。

具体实施方式

为了更清晰地阐明本发明的技术方案，下面结合具体实施方式做进一步阐述。

一种褐藻胶寡糖脂质体的制备方法，所述褐藻胶寡糖脂质体的组分及其含量：褐藻胶寡糖 8.5mg/mL，卵磷脂99mg，胆固醇22mg，吐温1%（1%的PBS量），其余为PBS。

1、褐藻胶寡糖脂质体的制备

    称取一定量的胆固醇和大豆卵磷脂（共121mg）于小烧杯中，溶解于15ml有机溶剂中(氯仿：乙醚=2:3)。用PBS配制褐藻胶寡糖溶液3mL，然后倒入配制好的有机溶剂中，磁力搅拌30min，超声5min，再磁力搅拌5min，38℃旋转蒸发，使乙醚和氯仿全部挥发掉，使之在圆底烧瓶底部形成一个均匀的薄膜；用PBS溶液定容洗膜，再加入一定量的吐温-80制备得到褐藻胶寡糖脂质体，将溶解后的液体超声17min于4℃冰箱保存备用。

2、空白脂质体的制备