[发明专利]环境水体致基因突变的遗传毒性检测技术及应用

权利要求书

1.一种环境水体致基因突变的遗传毒性高通量检测方法，所述方法为改进的SOS/umu实验方法，具体包括水样前处理、染毒、结果检测以及结果分析等步骤。

2.如权利要求1所述的方法，其中具体步骤：

(1)环境水体样品采集之后首先经过0.45μm玻璃纤维滤膜过滤、HLB固相萃取柱富集以及丙酮洗脱、合并，以及干燥等具体前处理步骤；

(2)实验试剂配制；

(3)细菌的复苏与预培养、染毒剂量设定、染毒后细菌培养以及最后结果测定；

(4)通过样品在600nm和420nm下的吸光光度值计算得到β-半乳糖酶活性(U)、诱导率(R)，进而判断其是否具有遗传毒性。

3.如权利要求2所述的方法，其中步骤(1)具体为：

(1)活化滤膜：使用活化后的0.45μm的玻璃纤维滤膜过滤水样，去除水样中粒径较大的杂质；活化方法为：使用马弗炉将0.45μm的玻璃纤维滤膜(GF/A，70mm，Whatman)于450℃-500℃温度下活化3h，活化后放在干燥器中室温平衡24h以上，使用前1h用超纯水再活化；

(2)HLB固相萃取柱活化：使用HLB固相萃取柱(Waters Oasis，6mL)富集水体中的有机物等，用于遗传毒性检测；每根HLB固相萃取柱先用6mL二氯甲烷浸泡5min，然后使溶液缓慢流出，待液面与上层滤板平行后，关上闸门，加入6mL甲醇，使二氯甲烷溶液完全流出后再关上闸门，之后加入6mL超纯水使之缓慢流出，最后柱内留有少量超纯水；

(3)过滤：待泥沙沉淀之后，再进行过滤；将0.45μm的玻璃纤维滤膜放于砂芯过滤装置对应位置，砂芯过滤装置连接真空泵(1500MA)进行过滤，过滤后的水样用润洗干净的棕色玻璃瓶保存；

(4)水样过柱：将HLB固相萃取柱安置在固相萃取仪顶端接口处，固相萃取柱顶端与大流量采样器相连，将采样器的采样头放置于装有过滤后的水样的玻璃瓶中；将固相萃取仪与抽滤瓶和真空泵连接，打开真空泵并小心开启固相萃取仪的阀门，调节每根柱子的流量，流速控制在6～8mL/min，每根HLB柱富集2L水样。富集完成后用真空泵抽干部分柱内水分，用氮吹仪将柱子吹干，若不立即使用可在-20℃保存；

(5)样品洗脱：在通风橱内，用10mL丙酮对HLB柱进行洗脱，使丙酮在无外力情况下自然流下，洗脱液用50mL棕色玻璃瓶收集，残留的丙酮用洗耳球吹下；丙酮可以稍微过量一些，保证样品洗脱液达到10mL；

(6)合并相同样品：将相同样品的洗脱液进行合并，首先对丙酮洗脱液进行氮吹浓缩，剩余约200μL后合并相同水样至同一样品管，将其它各管用少量丙酮冲洗3-4次，同样合并到同一样品管中，用氮吹仪吹至完全干燥；

(7)按照1L水样定容至10μL浓缩液的比例用DMSO定容样品，-20℃保存。