[发明专利]龙牙草中总黄酮和鹤草酚的提取纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于中药活性成分提纯领域，具体涉及一种龙牙草中总黄酮和鹤草酚的提取纯化方法。

背景技术

龙牙草(Agrimonia.Pilosa ledeb)为蔷薇科龙芽属植物Agrimonia.Pilosa ledeb Varjaponica(Miq)Nakai的全草，又名脱力草、仙鹤草、石打穿和狼牙草等。主要分布在中国，朝鲜，蒙古，日本，俄罗斯，是一种常用中药。龙牙草含有丰富的营养物质和生理活性成分，龙牙草全草含龙牙草素(agrimvnias)，己知有龙牙草甲素，龙牙草乙素，龙牙草丙素，龙牙草丁素，龙牙草戊素和龙牙草己素等六种，尚有鞣质、甾醇、皂甙和挥发油等。按结构分类可分为：苯三酚缩合体、黄酮类、有机酸类、内酯和香豆素类以及其它成分，如龙牙草酚和鹤草酚(agrimophol)。其中，鹤草酚(Agrimophol)又名仙鹤草酚，为间苯三酚化合物，CAS号为65792-05-4，分子式C₂₆H₃₄O₈。为浅黄色晶体，熔点138-139℃，易溶于氯仿和苯，微溶于甲醇、乙醇，遇FeCl₃呈现褐色，遇浓H₂SO₄呈橙色，对猪肉绦虫、囊尾蚴、莫氏绦虫、短膜壳绦虫有杀虫功效。化学结构式为：

龙牙草黄酮是指从狼牙草中提取的黄酮类化合物的总称，包括黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类、花色素类、黄烷醇类、双苯毗酮类、查尔酮类、二氢查尔酮类、橙酮类和高异黄酮类等的化合物及其与单糖或寡糖形成的衍生物，呈弱碱性，难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醇等有机溶剂及稀碱水溶液中。

我国民间多用其全草止血消炎，根茎治痢，茎叶治肠道痢血。近几年来，临床上用龙牙草素作为止血药剂有报道称小鼠静脉注射龙牙草素后，使出血时间缩短45％；鹤草酚(Agrimophol)对猪肉绦虫囊尾蝴、幼虫、莫氏绦虫和短膜壳绦虫均有确切杀灭作用，鹤草酚使莫氏绦虫在5分钟内产生痉挛性麻痹，其自发活动，对电刺激反应均消失；龙牙草煎剂及其甲醇浸膏中所提制的棕色粉末对草兰氏阳性菌有一定的抑制作用；龙牙草水提取物及酸水提物对芥子油或因感染葡萄球菌所致的结膜炎有消炎作用；龙牙草水浸膏在体外对癌细胞JTC-26有强烈的抑制作用，但对人的正常纤维细胞全无抑制作用；龙牙草乙醇浸膏给麻醉兔、犬体静注，可使血压上升。并能兴奋呼吸而其水提取部分的醇提取物使家兔血压降低，另有报道指出，本品浸剂及水提取物灌流兔耳血管，低浓度时无影响，高浓度呈扩张反应，并能对抗肾上腺素的缩血管作用。浸剂和龙牙草素对离体蛙心均有强心作用；能增加蛙和蟾蛛的心率及收缩强度。而水提取部分的乙醇提取物对离体蛙心则有抑制作用；水提取部分的乙醇提取物对兔和豚鼠离体肠管，低浓度兴奋，高浓度则抑制。龙牙草内酯能降低离体兔肠的收缩幅度及张力，而后使肠停止于松弛状态，此外水提取物及酸水提取物对电刺激齿的家兔痛觉有抑制作用。龙牙草系能降低小鼠和兔红血球的脆性，还有降血糖作用。鉴于龙牙草的众多药理作用以及在东北地区，特别是黑龙江省内的资源分布对龙牙草有效成分系统性研究是极其必要的。

从龙牙草根中曾分离出一种酚性内酯(Agimonlide)从其茎叶中分离出二种黄酮甙(Lutedin-7-β-D-glueoside和Apigenin-7-β-D-glucoside)从同属植物龙牙草(A.eupatoria)中离出大量鞣质，维生素K，酚性甙，乌索酸，香草酸，鞣花酸，三萜类，黄酮类，挥发油以及一些抗病毒，抗结核杆菌等物质。国内沈阳药学院天然药物研究室的裴月湖、李铣、朱廷儒等人对龙牙草的根芽作了大量的研究工作，从龙牙草根芽的苯提取物和丙酮提取物中分得反式对羟基肉桂酸酯的同系物混合物(I)和一个新的异香豆精甙(II)通过理化性质，波谱分析(UV，IR)及化学降解，I被确定为反式对羟基肉桂酸C₂₂C_24-23，结构为直链一元饱和醇的酯，II被确定为龙牙草内酯-6-β-D-葡萄吡喃糖甙。从龙牙草根芽的石油醚冷提取物中分得鹤草酚，结构为正二十九烷，(R)-(-)-龙牙草酚B，B-谷幽醇和伪绵马素后，又将石油醚冷浸后的龙牙草根芽依次用苯、氯仿、丙酮、和乙醇冷浸而后分得软脂酸和胡萝卜甙。