[发明专利]阿普洛尔对中央记忆性T细胞体外扩增中的应用

说明书

技术领域

本发明属于中央记忆性T细胞体外扩增技术领域，更具体地，涉及阿普洛尔对中央记忆性T细胞体外扩增中的应用。

背景技术

阿普洛尔（英语：Alprenolol），有肾上腺素β受体部位竞争性地抑制儿茶酚胺的作用。通过减弱或防止β受体兴奋而使心脏的收缩力与收缩速度下降,通过传导系统的传导速度减慢,使心脏对运动或应激的反应减弱。因此，用于心绞痛的治疗，减低心肌氧耗，增加运动耐量。由于阻滞心脏起搏点电位的肾上腺素能兴奋故用于治疗心律失常。阿普洛尔通过中枢、肾上腺素能神经元阻滞、抗肾素活性以及心排血量减低等降低血压，适用于治疗高血压。用于治疗嗜铬细胞瘤及甲状腺机能亢进，使β1和β2受体的活动均处于抑制状态。

由于T细胞在免疫系统中起着重要的作用，越来越多的研究小组尝试运用T细胞的过继治疗的方式来进行肿瘤治疗。中央记忆性T细胞（TCM）具有自我更新的能力，而且应答时间短，作用时间长，对人体的副作用小。今年来，多个研究组报道，发现具有记忆功能的T细胞回输肿瘤患者体内以后，治疗效果明显并且持续治疗时间长，可以减少患者的痛苦以及降低细胞体外培养次数过多的生物安全风险。但是在人体内相对数量较少，且由于体外长时间培养的T细胞会使T细胞失去活力，绝大部分细胞分化为终末分化的效应细胞，使得回输体内的T细胞存活时间过短，无法产生持续的杀伤肿瘤细胞的功能，因此如何在体外获得大量的记忆性T细胞是细胞免疫治疗的一个新的研究热点。

目前，国外的许多研究小组通过构建人工抗原提呈细胞，将其应用于T细胞的体外培养，提高T细胞的存活时间，用于过继免疫治疗，但要获得足够量的T细胞，技术要求复杂，培养的成功率较低。在进行T细胞治疗时，主要策略是先通过克隆扩增，得到足够量的具有杀伤功能的T细胞，可以与DC等提呈细胞共培养，也可以直接用相关肿瘤抗原刺激细胞克隆扩增，得到具有特定肿瘤抗原特异性的T细胞。此种办法培养得到的T细胞未经过任何转基因修饰，安全性较高。但这种肿瘤高反应性的细胞需要扩增至临床需要的10⁹~10¹¹治疗剂量的数量数，过程持续时间比较长，对于肿瘤患者来说时间也是一个需要更多考虑的因素。而且体外培养的时间长，细胞容易变老，活力下降，多为终末分化的细胞，在体外有较好的效果，但是在体内存活时间较短，治疗效果受影响。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有中央记忆性T细胞体外扩增技术的不足，提供阿普洛尔对中央记忆性T细胞体外扩增中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了阿普洛尔对中央记忆性T细胞在体外扩增上的应用。

优选地，所述阿普洛尔的浓度为5~20uM。

更优选地，所述阿普洛尔的浓度为10uM。

优选地，所述中央记忆性T细胞为CD4⁺ T细胞。

优选地，所述中央记忆性T细胞的提取方法是先将外周成分血与含2% BSA和0.5% EDTA的PBS按1:4混合均匀；然后将稀释后的血液缓慢加入淋巴细胞分离液的上方，二者的比例为1:1；离心300×g 30 min；小心吸取单核细胞，置入另一离心管中，加入5倍体积的含0.5% BSA和2% EDTA 的PBS稀释，混合均匀后，300×g 15 min；重复上一步骤一次；孵育CD4+ T细胞阴选一抗，15 min；用10倍体积的含0.5% BSA和2% EDTA 的PBS稀释，混合均匀后，300×g 12 min；孵育带有磁珠的二抗，30 min；过柱进行细胞分选，得到CD4⁺ T细胞。

优选地，所述中央记忆性T细胞的培养方法是在5% CO₂、饱和湿度及37^oC条件下将5×10⁵个/孔的CD4⁺ T细胞置于1 mL含10%胎牛血清的RPMI1640中培养

与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：

本发明首次公开了阿普洛尔在体外T细胞培养中的应用，方法安全有效，成本低廉，为过继免疫治疗的广泛开展提供了良好的技术支持。

附图说明

图1为阿普洛尔浓度为10uM时对CD4⁺ T细胞中CD4⁺ TCM所占比例的检测。

图2为不同浓度的阿普洛尔对中央记忆性CD4⁺ T细胞的比例扩增效果。

具体实施方式