[发明专利]一种用于测定抵抗素的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和检测方法，特别涉及一种用于测定抵抗素的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和检测方法，本发明属于疾病的诊断或检测技术领域。

背景技术

抵抗素(resistin)是2001年Steppan等在小鼠脂肪细胞中发现的一种新的细胞因子，因它有降低胰岛素敏感性的作用，故将其命名为抵抗素。它属于抵抗素样分子家族(resistin-like molecules，RELMs)分泌型蛋白质家族成员。

人类抵抗素是一种12.5kDa的蛋白质，其前体含有108个氨基酸，分泌到血液的抵抗素有两种状态，即六聚体和三聚体。它参与了炎症反应，与一些细胞因子、炎症介质、粘附分子相互作用，能促进IL-6、IL-12等炎性细胞因子的合成和释放。抵抗素具有类似炎症因子的蛋白分子结构,与单核巨噬细胞的功能有关，能影响多形核白细胞的趋化运动和氧化爆发，导致患者免疫功能紊乱，在免疫炎症反应中发挥重要作用。抵抗素作为一种前炎性分子，在机体出现炎症的情况下呈高水平表达状态。

正常条件下人血清抵抗素的含量极低，约为14pg/ml(运用高效液相色谱分析)，在机体出现炎症的情况下，机体血液中抵抗素的含量急剧升高至60-350ng/ml。该指标主要用于溃疡性结肠炎、消化性溃疡急性穿孔及机体内脂肪的沉积的实时监测。

许多临床研究证明，抵抗素在不同医学领域对诊断和指导治疗有很高的价值，与目前所应用的诊断指标相比，抵抗素在鉴别诊断以急症腹痛为主诉的疾病及严重炎症方面提供了额外的信息。随着临床实践性研究的不断深入，临床数据的不断积累，抵抗素将作为一个全身性炎症及以急症腹痛为主诉的疾病辅助和鉴别诊断的常规指标将成为共识，并将得到广泛的应用。

目前，在国内市场上还不存在能够对抵抗素进行定量测定的检测方法和相应的试剂盒。本发明通过胶乳增强免疫比浊法对患者血清中抵抗素水平的定量检测，实现对以急症腹痛为主诉的常见疾病溃疡性结肠炎、消化性溃疡急性穿孔等的早期排查，同时也可实现机体内脂肪的沉积的实时监测，为临床医生做出及时合理的诊断提供辅助工具。

发明内容

发明目的：本发明的第一个目的是提供一种测定抵抗素的胶乳增强免疫比浊试剂盒，本发明所建立的用于测定抵抗素的胶乳增强免疫比浊试剂盒采用免疫比浊法，以乳胶增强免疫比浊法为测定原理可实现对抵抗素的快速且准确的检测。

本发明的第二个目的是提供了上述测定抵抗素的胶乳增强免疫比浊试剂盒的制备方法。

本发明的第三个目的是提供了测定抵抗素的胶乳增强免疫比浊试剂盒的检测方法。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于测定抵抗素的胶乳增强免疫比浊试剂盒，所述的试剂盒包括稀释液、胶乳制剂、空白液、校准品和质控品；其中所述的胶乳制剂中含有分别偶联了抵抗素单克隆抗体以及抵抗素多克隆抗体的不同粒径大小的羧基化的聚苯乙烯胶乳。

其中，上述偶联了抵抗素单克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的粒径为50-80nm，偶联了抵抗素多克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的粒径为150-200nm。

其中，上述稀释液为含有2M NaCl，2％(w/w)PEG20000，0.5％(w/w)BSA，0.1％(w/w)proclin-300的0.05M pH＝8.4的Tris-HCl缓冲液。

其中，上述空白液为0.05M PBS磷酸缓冲液。

其中，上述校准品包括抵抗素浓度分别为0、0.1、0.5、2.5、10、30μg/L的校准品。

其中，上述的质控品中抵抗素的浓度为0.21-0.29μg/L。

上述的用于测定抵抗素的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括以下步骤：1)稀释液配制；2)胶乳制剂的配制；3)标准品稀释液的配制；4)标准品的配制；5)校准品及质控品配制；6)胶乳颗粒稀释；7)将检测合格的胶乳微粒工作液进行分装组装成试剂盒。

其中，上述胶乳制剂的配制方法如下：1)羧基化的聚苯乙烯胶乳活化；2)偶联了抵抗素单克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的制备；3)偶联了抵抗素多克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的制备；4)将两种胶乳溶液进行混合。

用于测定抵抗素的胶乳增强免疫比浊试剂盒的检测方法，包括以下步骤：

1)试剂配置：试剂开瓶即用，缓冲液及乳液试剂在测定前要充分混匀；

2)先加入稀释液试剂，再加入全血样本，37℃反应5min后加入胶乳试剂读取OD570的检测数据；