[发明专利]人体血清凝血因子Ⅷ中的病毒过滤方法

说明书

本发明公开一种能使人血浆来源的凝血因子Ⅷ溶液快速流通过纳滤材料的方法，在浓度为10—100IU/ml，pH为6.0—8.0的人体血清凝血因子Ⅷ水溶液中添加浓度为50—500mmol/L的医学上可接受的水溶性二价金属盐，溶液通过10—35纳米孔径的过滤器除去病毒，实现纳滤方法除去病毒的工业应用，通过透析除去加入的金属盐，可恢复凝血因子Ⅷ的天然结构。过滤过程凝血因子Ⅷ效价的衰减低于10%，优选情况下，凝血因子Ⅷ效价的衰减低于6%，明显优于通用S/D和干热灭活法。

技术领域

本发明涉及医用血制品制造方法，具体是采用纳米孔径的过滤材料过滤除去人体血清凝血因子Ⅷ中的病毒的方法。

背景技术

人体血清凝血因子Ⅷ（FⅧ）是指从人血浆中提取获得的血液制品，临床上主要用于凝血因子Ⅷ缺乏所致的凝血障碍纠正，主要是甲型血友病的治疗。为确保产品的临床使用安全，产品生产过程必须进行病毒去除/灭活步骤，主要的血源性病毒包括脂包膜病毒例如乙型肝炎病毒，乙型肝炎病毒（HBV），丙型肝炎病毒，艾滋病毒和人类T细胞白血病病毒（HTLV-I）；无包膜病毒，如肝炎病毒（HAV）以及细小病毒B19和TSE朊病毒导致变异型克雅氏病（vCJD）。

制造工艺必须平衡安全需求（病毒去除和/或灭活的需要）和提供高收率，合理的成本和有效的高纯度的最终产品，现在使用的领先病毒灭活/去除技术是巴氏灭菌法，干热处理，S/D处理和纳米过滤，在凝血因子Ⅷ制品上，则通用S/D和干热灭活法，但S/D法和干热灭活法会导致凝血因子Ⅷ效价衰减12—15%,甚至更高。

纳米过滤，也称为“病毒过滤”，是基于使用的膜具有多层微孔结构，可以通过尺寸排阻清除病毒。该技术条件温和并有效分离蛋白和病毒，包括包膜和无包膜病毒，可用于脆弱的凝血因子Ⅷ并保持完好的FⅧ天然结构。用10—35纳米的过滤器能有效去除非脂包膜细小病毒，如：HAV/猪细小病毒（PPV，一个耐受的病毒模型）/TSE(分子大小约18-35nm)。而凝血因子Ⅷ分子较大，被认为不能有效的穿过10-35nm的过滤器，而更大空隙的过滤器（例如≥35nm）又不能有效去除HAV、B19和TSE。

采用10—50nm的过滤器将凝血因子Ⅷ溶液进行病毒过滤时，过滤速度非常缓慢，且容易造成过滤器堵塞，使整个过滤中断，而且过滤器的有效过滤载量非常小，达不到5L/m²。过滤速度小于1L/m²·h，因此对于凝血因子Ⅷ而言，工业上没有采用过滤方法除去病毒。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能使人血浆来源的人体血清凝血因子Ⅷ溶液快速流通过纳滤材料的方法，由此实现采用纳滤方法除去病毒的工业应用。

本发明在浓度为10—100IU/ml，pH为6.0—8.0的人体血清凝血因子Ⅷ水溶液中添加浓度为50—500mmol/L的医学上可接受的水溶性二价金属盐，溶液通过10—35纳米孔径的过滤器除去病毒。

本发明中，水溶性二价金属盐可以是钙盐、锌盐、亚锡盐、铜盐、二价锰盐等，优选是水溶性钙盐或锌盐。水溶性钙盐包括氯化钙、醋酸钙、柠檬酸钙、草酸钙、酒石酸钙、葡萄糖酸钙或乳酸钙，优选是氯化钙。水溶性锌盐包括氯化锌、硫酸锌、醋酸锌、柠檬酸锌、草酸锌、酒石酸锌、葡萄糖酸锌或乳酸锌，优选是氯化锌或硫酸锌。

钙离子或锌离子浓度优选为200—400mmol/L。

溶液中还可加入氨基酸，其浓度为50—500mmol/L，优选200—500mmol/L。氨基酸优选为L-精氨酸、L-组氨酸或L-赖氨酸的一种或以上。

人体血清凝血因子Ⅷ水溶液中，人体血清凝血因子Ⅷ效价优选为20—70IU/ml。