[发明专利]一种基于单克隆抗体的重金属汞检测的免疫层析试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及可分泌抗重金属汞的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体，以及一种基于单克隆抗体的重金属汞检测免疫层析试纸条。

背景技术

重金属汞是自然界存在的一种重要的金属元素。由于具有多种优良特性，汞及其化合物在工农业生产中应用十分广泛。然而，汞是一种对人体和高等生物具有很强毒性的金属污染物。早在20世纪50年代日本熊本水俣病爆发之后，汞的污染问题就引起了人们的关注。近年来，随着城市化进程的不断加快和工业化水平的迅速提升，由生产、生活所致的汞及其化合物污染日趋严重并再度成为全球热点问题之一。

当前，含汞颗粒物的大气沉降、农用含汞杀菌剂的大量使用、工业及生活含汞废水的排放等问题不仅使环境中汞污染现象十分严重，造成农产品中重金属污染超标，严重影响我国农产品质量和国际竞争力，而且还严重危害人类的身体健康。汞对人体的危害主要表现在导致肾损伤(以无机汞形式存在)、中枢神经系统紊乱、智障、甚至死亡(以有机汞形式存在)。汞污染和其它重金属污染往往会造成二种或多种重金属元素的复合污染，并具有普遍性、复杂性等特点，给生态环境带来了更大的压力。因此，对环境中重金属汞污染的检测工作越来越受到人们的关注。

传统的重金属检测方法多采用化学仪器检测，如利用原子吸收光谱法、电感耦合等离子体原子发射光谱法、离子色谱仪、X射线荧光光谱法、气相色谱-质谱联用法等，这些检测方法虽然能够精确测量样品中单种金属的总量，但检测相对费时、费力，费用昂贵，需要具备大型分析仪器设备的室内进行，不适应实践中快速简便的需要。

重金属的免疫检测方法具有快速、廉价、简便、特异的优点，便携而有利于进行现场监测，克服了传统检测方法的缺点。但重金属离子本身免疫原型低，很难制备出针对重金属离子的单克隆抗体。因此，为克服该困难，本发明通过化学合成高选择性重金属离子捕获螯合剂，制备重金属离子螯合物，与载体蛋白偶联获得完全抗原，筛选出能够分泌针对环境水中重金属汞离子的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。并利用该杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体建立了针对环境水中重金属汞离子的免疫层析试纸条，所建立的免疫层析试纸条对水体中重金属汞离子的检测灵敏度可达到0.5ng/mL。

发明内容

本发明的目的是提供一种可稳定分泌抗重金属汞离子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体。

本发明的另一目的是提供一种基于单克隆抗体的重金属汞离子检测免疫层析试纸条。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

本发明提供提供了杂交瘤细胞株2F2，该细胞株已于2015年3月31日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO.C201512。

识别重金属汞的单克隆抗体，由保藏编号为CCTCCNO.C201512的杂交瘤细胞株2F2分泌产生。

本发明提供的抗重金属汞单克隆抗体来自于BALB/C小鼠腹腔。该小鼠经过液体石蜡预处理后，注射杂交瘤细胞株2F2，并采集该小鼠的腹水，利用辛酸-硫酸铵法进行纯化，收集得到抗重金属汞单克隆抗体。

本发明提供的一种基于单克隆抗体的重金属汞离子检测试纸条，其特征在于：它包括衬板，衬板的一面自上而下依次黏贴吸水纸、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接。所述检测垫为硝酸纤维素膜，该膜自上而下设计1条质控线和1条检测线；所述质控线包被有兔抗鼠IgG；所述检测线包被有MNA-OVA偶联物；所述金标垫为玻璃纤维素膜，喷涂有纳米金标记的抗重金属汞单克隆抗体，该单克隆抗体为由保藏编号为CCTCCNO：C201512的杂交瘤细胞株2F2分泌产生的单克隆抗体。

有益效果

(1)本发明提供的基于单克隆抗体的重金属汞离子检测免疫层析试纸条，检测线上所使用的包被源不含有金属汞，可避免在试纸条使用过程中产生的二次污染；可实现对水体中的重金属汞离子的直接检测，无需螯合剂的预处理

(2)本发明提供的基于单克隆抗体的重金属汞离子检测免疫层析试纸条，具有灵敏度高、特异性高的特点，该试纸条对水体中的重金属汞离子的检测灵敏度可达到0.5ng/mL；对CH₃Hg，Fe³⁺，Ca²⁺，Mg²⁺，Zn²⁺，Pb²⁺，Mn²⁺，Cd²⁺的交叉反应率在0.1％以内。

具体实施方式

实施例1：杂交瘤细胞株2F2的筛选