[发明专利]ZFP36前列腺癌预后诊断的检测试剂及其试剂盒

权利要求书

1.一种用于前列腺癌预后诊断的检测试剂，其试剂组成如下(20人份)：

        H₂O₂                               1-1.5ml

       非免疫羊血清工作液                 1-1.5ml

一抗：兔源抗ZFP36多克隆抗体             2.5-20ul

二抗：生物素标记的羊抗兔的IgG工作液       1ml

链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液              1ml

二氨基联苯胺显色剂                        2-3ml。

2.如权利要求1所述的用于前列腺癌预后诊断的检测试剂盒，包含检测肿瘤炎症状态的检测试剂。

3.一种用于前列腺癌预后诊断的检测试剂盒使用方法如下：

(1) 将经拷片脱蜡、水化和抗原修复后的切片置于孵育盒中，用阻水笔把组织圈住，以免滴加后的试剂扩散，吸水纸将切片上的水稍吸去，不要碰到组织，加H₂O₂ 50ul覆盖组织后室温孵育30min，以阻断内源性过氧化物酶的活性；

(2) 磷酸盐缓冲液冲洗3min，重复 3次；

(3) 吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50ul非免疫羊血清工作液，室温下孵育15分钟；

(4) 轻轻甩去血清，不漂洗，滴加50ul一抗（2mg/ml兔源抗ZFP36多克隆抗体）（ZFP36抗体:PBS =1:100），室温下孵育60分钟或4℃过夜；

(5) PBS冲洗5min， 重复3次；

(6) 吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50ul二抗：生物素标记的羊抗兔的IgG工作液，室温下孵育20分钟；

(7) PBS冲洗5min，重复3次；

(8) 吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，每张切片滴加50ul链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温下孵育15分钟；

(9) PBS冲洗3min，重复 3次；

(10) 吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加100ul新鲜配制的二氨基联苯胺显色剂（20×DAB缓冲液、20×DAB底物、20×DAB色原各50ml滴加至850ml双蒸水中配制成1ml新鲜显色液，有效使用时间为30min）显色，自来水充分冲洗，复染，脱水透明，封片；

(11)免疫组织化学检测结果判断结果判定标准：Leica荧光显微镜下，每张切片随机选取五个高倍镜视野观察细胞，细胞质和（或）细胞核出现棕黄或棕褐色颗粒为阳性细胞，根据阳性细胞染色强度以及阳性细胞在总细胞中所占数量比例判定实验结果。按染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；然后按阳性细胞率评分：肿瘤细胞内无阳性染色者为0分，阳性细胞率≤10％为1分，11％～50％为2分，51％～75％为3分，＞75％为4分. 两者积分的乘积作为染色结果的评判标准：0定为-，阴性；1～4分为+，弱阳性；5～8分为++，阳性；9～12分为+++，强阳性。