[发明专利]一种黄芪多糖磷酸酯制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽药合成领域，具体涉及一种黄芪多糖磷酸酯制备方法。

背景技术

     黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，其味甘、性温,有补气升阳、固表止汗、利尿托毒、排脓、敛痛生肌等功效，是临床常用中药。药理研究证明,其中黄芪多糖是黄芪的主要活性成分之一，可作为免疫促进剂或调节剂，具有增强机体抵抗力、促进抗体合成、双向调节血糖和保护心血管系统等作用。

糖的磷酸酯类也是一类比较重要的糖类衍生物，在自然界中也较多见。某些多糖磷酸酯化后也会产生显著的生物活性。通过制备磷酸酯化的牛膝多糖，药理实验表明其具有抗S180肉瘤和小鼠Lewis肺癌的作用。磷酸酯化试剂有磷酰氯、磷酸酐、磷酸或其盐。磷酸及磷酸酐或两者的混合物是最早采用的磷酰化试剂，但一般糖苷键在酸性条件下极易水解，而此反应又是在高温下进行，此条件下糖易降解，从而使产物收率和含量均不高，大大限制了该法的应用。但一些对酸稳定的多糖或寡糖,用此法进行磷酰化就比较简单易行。磷酸盐廉价、易得，但反应活性极低,不易获得高含量的产物。与磷酸相比其优点是一般不会引起多糖的降解。常用的磷酸盐有磷酸氢钠、磷酸二氢钠、三聚磷酸钠、偏磷酸钠或它们的混合盐。

发明内容

本发明提供一种黄芪多糖磷酸酯制备方法，本发明实现上述目的所采用的技术方案如下：一种黄芪多糖磷酸酯制备方法，多聚磷酸与黄芪多糖在碱性条件下，发生酯化反应获得了高含量的黄芪多糖单酯。

所述的黄芪多糖与多聚磷酸的体积比1：（1.5至3.0）。

所述的酯反应时，pH为6至12。

所述的酯反应时，反应温度为70℃至100℃。

所述的酯反应时，反应时间为8h至24h。

本发明具有如下的积极效果：本发明为获取磷酸化多糖，提高中药多糖的生物活性，可用磷酸化的方法进行修饰;黄芪多糖是黄芪的主要有效成分，在调节免疫、抗病毒、抗衰老等方面具有重要的作用；本发明采用多聚磷酸对多糖进行磷酸化修饰，用正交设计法对修饰条件进行优选，得到了磷酸修饰的最佳条件；并测定了修饰产物的抗抗猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活性，获得较好的结果。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步详细说明。本发明提供一种黄芪多糖磷酸酯制备方法，该方法是在新制的多聚磷酸和黄芪多糖，在碱性条件下，发生酯化反应得到黄芪多糖磷酸酯。

一种黄芪多糖磷酸酯制备方法，多聚磷酸与黄芪多糖在碱性条件下，发生酯化反应获得了高含量的黄芪多糖单酯。

所述的黄芪多糖与多聚磷酸的体积比1：（1.5至3.0）。所述的酯反应时，pH为6至12。所述的酯反应时，反应温度为70℃至100℃。所述的酯反应时，反应时间为8h至24h。

多糖的制备：取 80⁰ C烘干及粉碎后的黄芪1000g，加入足量的 80%乙醇加热回流脱脂 3次，向药渣加10倍体积的水煎煮 3 次，第一次 3h，第二次2h，第三次1h；抽滤药渣，合并 3 次滤液后浓缩。向浓缩液加入95%乙醇到乙醇体积分数为80%，于4⁰C静置 12h后，以 3000r/min离心，收集沉淀部分，真空干燥后复溶，加90%乙醇到乙醇体积分数为80%后，离心，收集沉淀，冻干，重复此操作 3 次，至冻干物呈白色后复溶，加入相对于粗多糖质量分数为1%的胃蛋白酶，于室温放置12h后，用Savede 法除去蛋白质， 然后用截留分子质量为3.5ku 的透析袋处理，得到黄芪多糖。

黄芪多糖的含量测定：

标准溶液的制备：取经105⁰C干燥至恒重的葡萄糖100毫克，置100毫升容量瓶中加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取十毫升，置100毫升容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成0.1毫克/毫升的葡萄糖标准溶液。

标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准溶液0.1-0.6毫升共6份，分别置25毫升容量瓶中，加蒸馏水补充至2.5毫升，再加入5%苯酚溶液1.0毫升，摇匀，迅速加浓硫酸5.0毫升，摇匀，放置5.0M/N置80⁰C水浴中加热15分钟，取出，迅速冷却至室温。另以2.0毫升蒸馏水同上平衡操作作为空白对照，在490纳米波长处测定吸光度，并求出回归方程。

经计算的标准回归方程为：C=0.216A-6.38×10^-3，R=0.998。