[发明专利]雨生红球藻的破壁方法

权利要求书

1.雨生红球藻的破壁方法，其特征在于包括以下步骤：

1)藻种平板培养；

2)通过血球计数板对低温保存的藻液进行计数，按初始藻细胞密度为5×10⁴cells/ml的细胞密度接种至装有一级种子BBM+V培养基的三角瓶中，放置于光照培养箱中培养，每天定期手动摇瓶2次，待藻体长至对数生长期7～10d，得一级种子液；

3)取一级种子液接种至装有二级种子BBM+V培养基的三角瓶中培养，每天手摇2次，得二级种子液；

4)在三角瓶中装入发酵培养基，按初始藻细胞密度为5×10⁴cells/ml的细胞密度接入二级种子液，放置于光照培养箱中培养，每天定期手动摇瓶2次，每组细胞做三个生物学重复；

5)利用高压匀浆破碎法、高速珠磨法或手动研磨法对藻体进行破壁处理，取样用于类胡萝卜素释放量及细胞破碎率等参数的分析。

2.如权利要求1所述雨生红球藻的破壁方法，其特征在于在步骤1)中，所述藻种平板培养的具体方法为：在BBM平板培养基中按质量百分比加入15％琼脂粉，121℃灭菌20min后，冷却至50℃，倒入平板；使用接种环从该平板中挑取少量藻体，涂画于新平板中；将新平板置于温度为23.8℃、光照强度为20μmol photos m^-2s^-1的光照培养箱中，培养7～10天；最后，将新平板置于避光条件下保存，每2个重新涂画一次平板，进行传代培养后再保存，以保持藻种活性。

3.如权利要求2所述雨生红球藻的破壁方法，其特征在于所述BBM平板培养基组成为NaNO₃ 2.9mM，MgSO₄ 0.3mM，NaCl 0.43mM，K₂HPO₄·3H₂O 0.43mM，KH₂PO₄ 1.29mM，CaCl₂·2H₂O0.17mM，KOH 0.55mM，H₃BO₃ 0.18mM，EDTA-Na₂ 0.12mM，ZnSO₄·7H₂O 0.0307mM，MnCl₂·4H₂O0.0073mM，冰钼酸钠0.0049mM，CuSO₄·5H₂O 0.0063mM，Co(NO₃)₂·6H₂O 0.0017mM，EDTA-Fe³⁺1.8mM，琼脂15～20g/L，pH 6.8，121℃灭菌20min。

4.如权利要求1所述雨生红球藻的破壁方法，其特征在于在步骤2)中，所述一级种子BBM+V培养基的用量为10mL；

在步骤3)中，所述一级种子液的用量为5mL；所述二级种子BBM+V培养基的用量可为50mL。