[发明专利]一种凤丹组织培养方法

说明书

技术领域

    本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种凤丹组织培养方法。

背景技术

凤丹(Paeonia ostii)为芍药科芍药属多年生小灌木牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）品种，集药、食、观赏为一体,尤其以其根皮中丹皮酚在镇痛、抗菌消炎、治疗心血管、肿瘤等疾病方面显示出较好的药理活性,同时,除用于医药制剂原料外,现还广泛应用于牙膏及护发、护肤、美容等日化产品的原材料,具有良好的临床应用和开发价值。

凤丹,实为牡丹品种,其具有药用价值的同时,也兼有观赏价值。关于牡丹的组织培养,国内的研究不少,但绝大部分的研究都是为了获得观赏型牡丹品种的无菌苗为目的。本发明以凤丹新抽芽为外植体，通过外植体消毒、愈伤组织诱导、增殖、丛生芽诱导、生根诱导等过程实验了凤丹的离体培养，为凤丹的工厂化生产和推广应用提供了技术支持。

发明内容

    本发明以凤丹新抽芽为外植体，通过外植体消毒、愈伤组织诱导、增殖、丛生芽诱导、生根诱导等过程实验了凤丹的离体培养，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种凤丹组织培养方法，包括以下的步骤：

（1）外植体消毒处理：选择0.5g/L GA₃处理2年生实生苗后新抽的新芽为外植体，先用洗衣粉水浸泡10～30min,再用自来水漂洗干净,然后置于超净台上,用75%酒精消毒30～60s,无菌水冲洗4～6遍后再用2.5 %次氯酸钠溶液消毒10～30min，消毒滤纸吸干水分后备用。

    （2）愈伤组织诱导：将步骤（1）消毒处理好的新芽切取0.5cm左右长度的茎段接种于诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养。接种后先黑暗条件下培养，待出现愈伤组织后再移至置于每天光照12～14小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计诱导率。

    （3）增殖培养：将步骤（2）诱导培养得到的愈伤组织转接到增殖培养基中进行继代。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计增殖情况。

    （4）丛生芽诱导：将步骤（3）继代得到的愈伤组织转接至芽诱导培养基中进行诱导分化培养。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计分化情况。

    （5）生根培养：将经步骤（4）分化培养得到的无根试管苗转接至生根培养基中进行生根。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计生根情况。

（6）炼苗移栽：试管苗生根20天后，具备发达健壮的根时将组培苗不揭瓶盖在自然光下炼苗7天。移栽时用镊子从瓶中取出组培苗,小心洗净基部残留的培养基,选择健壮苗移栽到消过毒的轻基质中，浇足水,遮荫处理。移栽后经常喷水,保持空气湿度。植株成活后转入正常土壤中定植。

    上述步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+1.0～3.0mg/L 6-BA+ 0.1～0.5mg/L NAA+0.1～0.5g/L LH+1～2g/L PVP+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

    上述步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+1.0～2.0mg/L6-BA+0.1～0.2mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

上述步骤（4）所述的芽诱导培养基为：MS+0.5～1.0mg/LNAA+0.1～0.5mg/L6-BA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

    上述步骤（5）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～5.0mg/LNAA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

本发明的优点是：以凤丹新抽芽为外植体，通过外植体消毒、愈伤组织诱导、增殖、丛生芽诱导、生根诱导等过程实验了凤丹的离体培养，为凤丹的工厂化生产和推广应用提供了技术支持。

具体实施方式

    以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1