[发明专利]一种耐阿霉素U87细胞模型及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞模型的建立，具体地说，涉及一种耐阿霉素U87细胞模型及其应用。

背景技术

脑胶质瘤是由于大脑和脊髓胶质细胞癌变所产生的、最常见的原发性颅脑肿瘤。年发病率约为3-8人/10万人口。如同其他肿瘤(疾病)一样，胶质瘤也是由于先天的遗传高危因素和环境的致癌因素相互作用所导致的。一些已知的遗传疾病，例如神经纤维瘤病(I型)以及结核性硬化疾病等，为脑胶质瘤的遗传易感因素。

化疗药物阿霉素(DOX)通过细胞内途径促进肿瘤细胞凋亡，常用于脑胶质瘤的治疗，但易发生耐药，而耐药后再化疗效果很差。普通脑胶质瘤细胞株在研究脑胶质瘤耐药机制中存在局限性，而脑胶质瘤耐药细胞株更能从分子生物学角度来研究其耐药机制，有助于进一步寻找脑胶质瘤耐药后的治疗方法。同时，脑胶质瘤等肿瘤也可导致癫痫发作，导致难治性癫痫，脑胶质瘤耐药细胞株也可用于难治性癫痫耐药的研究。

中国期刊《中华神经外科杂志》2009年4月第25卷第4期，刊出的论文“人神经胶质瘤耐阿霉素细胞株的建立及其耐药机制的初步研究”，选用常用的化疗药物阿霉素和人恶性胶质母细胞瘤细胞株SHG44为研究对象，用ADM浓度梯度递增结合间歇诱导法建立多药耐药的神经胶质瘤细胞株SHG44/ADM，并对SHG44/ADM的耐药特性及机制进行了初步研究，其建立的人神经胶质瘤耐药细胞株SHG44/ADM通过药敏实验表明对ADM的IC50为17.83±0.52，耐药指数为10.7，冻存3个月、复苏后对ADM耐药指数为10.5，对耐药的稳定性无明显影响。

中国期刊《中国临床神经外科杂志》2014年02期，刊出的论文“胶质瘤多药耐药细胞株U251/TMZ的生物学特性”，探讨了胶质瘤U25/替莫唑胺(TMZ)多药耐药细胞株的生物学特性，采用TMZ间歇浓度梯度递增法诱导建立胶质瘤多药耐药细胞株U251/TMZ，光镜观察细胞形态，细胞计数计算倍增时间，四甲基偶氮唑蓝法检测耐药指数，流式细胞仪检测细胞周期，逆转录-PCR法检测多药耐药性1(MDR1)、Bcl-2、多药耐药相关蛋白5(MRP5)、肺耐药相关 蛋白1(LRP1)等mRNA表达，结果胶质瘤耐药细胞株U251/TMZ对TMZ、依托泊苷、硫酸长春新碱、环磷酰胺、阿霉素的耐药指数分别为4.39、3.61、2.64、2.00、1.63。

U87细胞是人脑胶质瘤细胞系，被用于人脑胶质瘤病理机制的研究，以及人脑胶质瘤药物的筛选等。目前还未见耐阿霉素U87细胞模型的相关报道。而建立更多的耐药细胞模型对于探讨人脑胶质瘤耐药产生原因及其机制，进一步指导对人脑胶质瘤的治疗具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种耐阿霉素U87细胞模型。

本发明的再一的目的是，提供所述的耐阿霉素U87细胞模型的用途。

本发明的第三个目的是，提供所述的耐阿霉素U87细胞模型的建立方法。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种耐阿霉素U87细胞模型，所述的耐阿霉素U87细胞模型的保藏号为CCTCC C201531。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

所述的耐阿霉素U87细胞模型的用途，用于研究脑胶质瘤耐药机制、寻找脑胶质瘤耐药逆转的靶点、筛选治疗脑胶质瘤或解除脑胶质瘤耐药的药物。

所述的耐阿霉素U87细胞模型的用途，用于脑胶质瘤引起的难治性癫痫的机制研究、寻找脑胶质瘤引起的癫痫的耐药逆转靶点、筛选治疗脑胶质瘤引起的癫痫或解除脑胶质瘤引起的癫痫耐药的药物。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

所述的耐阿霉素U87细胞模型的建立方法，它包括以下步骤：

a)培养U87细胞；

b)U87细胞用阿霉素开始干预，然后换无阿霉素培养基，至细胞生长恢复正常即细胞稳定生长、形态饱满、无漂浮死细胞、传代密度为30％的情况下3至5天可长至90％后再开始正常传代并提高阿霉素的浓度，每次阿霉素的干预时间均为24小时；

c)对干预后的U87细胞进行检测，获得耐阿霉素U87细胞模型。 

本发明优点在于：