[发明专利]HSP90抑制肽偶联物及其在肿瘤治疗中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤靶向治疗剂，具体涉及一种热休克蛋白90抑制肽偶联物在制备治疗肿瘤的靶向治疗偶联物中的应用。

背景技术

恶性肿瘤严重威胁人类的生命健康，改善当前肿瘤的治疗效果是医药工作者的一项重要使命。临床使用的大部分化疗药物对肿瘤的靶向性较差，用药后并不是优先在肿瘤病灶富集，肿瘤药物总量通常只占总给药剂量的5-10％。同时化疗药物的毒副作用常常限制了化疗药物的最佳使用量，最终导致化疗不完全、早期复发和化疗耐药。

目前针对肿瘤细胞特有的突变信号通路的酪氨酸激酶抑制剂类在临床使用中获得了巨大成功。对于突变型病人而言，这类药物不仅疗效好，而且毒副作用很小。然而这些新型药物存在抑瘤谱窄、使用10-12月后出现耐药等不足。原癌信号通路之间存在多重平行关系，很多情况下可以互相补偿、代替，因而简单阻断一条通路往往不足以危及癌细胞的生存。为了弥补这种不足，人们开始着眼于这些通路的交汇点，希望以一种药物同时阻断多条通路，提高药物的作用效果，改善药物的抑瘤谱和病人个体普适性，HSP90就是其中一种。

HSP90是广泛存在于真核细胞的一种分子伴侣，正常条件下主要协助细胞内新合成的客户蛋白肽链(Nascent peptide of Client protein)以正确折叠成具有各种生化功能的酶、受体或信号因子等。在化疗药物作用下，肿瘤细胞启动保护性机制，其中包括快速上调HSP90的表达。这种保护机制是构成肿瘤化疗逃逸及耐药的重要基础。肿瘤细胞的HSP90表达水平普遍较正常细胞高2-10倍[1]，此外细胞膜上也有高丰度HSP90表达[2]。现已知有数十种原癌信号蛋白属于HSP90的客户蛋白[3]，从而使HSP90成为一个重要的原癌信号网络交汇点，对肿瘤细胞的HSP90分子伴侣功能进行抑制，就有可能同时促进多种原癌蛋白质的降解。同样HSP90通过调控细胞自噬过程参与细胞对药物的应答，因而抑制HSP90有望显著改善肿瘤治疗效果。

如发明人在其发明专利(专利号：ZL201310258476.0；发明名称：一种肿瘤特异性靶向肽及其应用)所述，利用噬菌体展示技术，筛选到与肺癌具有特异性结合的靶向肽(其氨基酸序列为LPLTPLP，下文简称为P7)，并将该肿瘤特异性靶向肽与包载多西紫杉醇的生物高分子材料聚乳酸连接，在制备肿瘤早期诊断和治疗试剂中的用途。在下文中，所述靶向肽与包载多西紫杉醇的聚乳酸形成的偶联物又称为靶向肽的纳米制剂(TN-DTX)。

发明内容

申请人提取了肿瘤细胞膜表面蛋白，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳回收蛋白并进行质谱鉴定，经过质谱鉴定明确氨基酸序列为LPLTPLP的靶向肽(下文简称为靶向肽)的结合位点蛋白为HSP90。通过蛋白印迹实验研究了所述靶向肽对HSP90的表达影响。结果显示，靶向肽作用于肿瘤细胞后，可以直接降低HSP90的表达。因此该靶向肽是一种HSP90的抑制肽。

如背景技术部分所述，HSP90在多种肿瘤细胞中高表达，有利于细胞对抗外界的温度、药物及放射线刺激，在肿瘤复发和耐药过程中发挥重要作用。申请人对靶向肽联合多西紫杉醇的作用进行了探讨。

多西紫杉醇及靶向肽处理后，肿瘤细胞内自噬相关蛋白Beclin 1及LC3的蛋白表达水平发生变化。单独给予靶向肽不影响肿瘤细胞内自噬相关蛋白Beclin 1及LC3的蛋白表达。单独使用多西紫杉醇时，细胞内Beclin 1表达水平明显升高，同时LC3-I型向LC3-II型发生转变，表明细胞内自噬水平升高。当同时加入多西紫杉醇及靶向肽后，与单纯使用多西紫杉醇相比较，自噬相关蛋白Beclin 1表达水平明显下降，LC3-I型向LC3-II型的转变也有所逆转，结果表明靶向肽能够显著抑制多西紫杉醇引起的肿瘤细胞自噬。

由此可以看出，所述靶向肽不仅具有靶向作用，与多西紫杉醇联合使用时能够促进肿瘤细胞由自噬向凋亡转变，从而提高对肿瘤细胞的杀伤作用。基于此，申请人将所述靶向肽与多西紫杉醇偶联制备一种集成靶向递送、自噬抑制和肿瘤杀伤功能于一体的偶联物，下文以DTX-P7表示。

本发明通过在体实验显示，与常规制剂和基于该靶向肽制备的纳米制剂相比，所述偶联物能够显著缩小肿瘤体积，对肺腺癌、乳腺癌、黑素瘤等细胞也有明显的杀伤作用。

本发明提供了基于该HSP90抑制肽在制备细胞毒性剂偶联物方面的用途。本发明所述的HSP90抑制肽能够特异性结合肿瘤细胞并抑制细胞内HSP90的表达。