[发明专利]鲍曼不动杆菌假定蛋白A1S_1462蛋白及制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种A1S_1462的重组蛋白及其制备方法和应用，该重组蛋白包含A1S_1462成熟肽，该重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。该重组蛋白表达量高，便于分离纯化，高效安全，可以直接与佐剂配合使用，用于制备抗鲍曼不动杆菌感染的亚单位疫苗以及相关的检测试剂盒。经动物实验证实，所述基因工程重组单价亚单位疫苗具有良好的抗鲍曼不动杆菌感染的免疫保护效果。为进一步的联合疫苗和多亚单位融合疫苗研究打下基础，同时对防治疫苗和诊断试剂盒的研制及应用具有重要的作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及鲍曼不动杆菌假定蛋白A1S_1462蛋白及制备方法和应用。

背景技术

鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)为非发酵革兰阴性杆菌，广泛存在于自然界，属于条件致病菌。该菌是医院感染的重要病原菌，主要引起呼吸道感染，也可引发菌血症、泌尿系感染、继发性脑膜炎、手术部位感染、呼吸机相关性肺炎等。国内资料表明，鲍曼不动杆菌约占临床分离的不动杆菌的70％以上。鲍曼不动杆菌对第三代和第四代头孢菌素的耐药率已达63.0％～89.9％。对四种氨基糖苷类(阿米卡星、庆大酶素、奈替米星、妥布霉素)和环丙沙星的耐药率菌达96.3％。我国目前的绝大多数菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢鲍曼不动杆菌派酮/舒巴坦和多黏菌素B保持敏感，但在呼吸道感染的治疗中效果较差。

由于现有抗生素难以有效治疗鲍曼不动杆菌感染，而新的可以用于治疗鲍曼不动杆菌感染的抗生素在短期内无法获得的情况下，治疗鲍曼不动杆菌引起的感染性疾病也变得日益复杂，近年来医学界的相关的病原微生物研究学习者也对鲍曼不动杆菌的预防和治疗进行了相关研究。西班牙Michael J.McCnnell等人利用急性脓血症小鼠模型对鲍曼不动杆菌灭活全菌疫苗的主动免疫和被动免疫两个方面进行了评价；同时，MichaelJ.McCnnell等人在2011年对鲍曼不动杆菌的外膜蛋白疫苗进行了研究，结果提示OMC可以刺激T细胞分泌IFN-γ及活化Th1及Th2辅助B细胞分泌IgG抗体，均对小鼠具有良好的免疫保护性。但是以上全菌疫苗和外膜复合物疫苗成分复杂，同时含有大量的内毒素，对机体的毒副作用较大，因此研发一种质量可控，安全有效的鲍曼不动杆菌疫苗是必然的趋势。

发明内容

本发明的目的是提供一种鲍曼不动杆菌蛋白A1S_1462蛋白及制备方法和应用，该蛋白可应用于制备抗鲍曼不动杆菌感染的亚单位疫苗以及相关的检测试剂盒。

本发明的技术方案如下：

鲍曼不动杆菌A1S_1462重组蛋白，包含A1S_1462成熟肽，所述成熟肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

所述重组蛋白通过标签蛋白GST融合表达，所述标签蛋白融合于所述A1S_1462蛋白的N端。

所述重组蛋白的氨基酸序列还包括在SEQ ID NO.1的氨基端和/或羧基端缺失、替代、和/或添加了1－20个氨基酸残基的具有免疫原性的变体，该变体与所述氨基酸序列具有至少80％的同一性。

该重组蛋白由融合表达并酶切后在成熟肽的的氨基端加入GPLGS五个氨基酸形成。

编码A1S_1462重组蛋白的多核苷酸。

A1S_1462重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：

1)设计PCR的引物如下：

正向引物

5'-CGCGGATCCATGGCACCTGTAAAAGAACAAAAAAT-3'

BamH Ⅰ

反向引物