[发明专利]一种产γ-氨基丁酸的工程菌及其构建和应用

权利要求书

1.一种产γ-氨基丁酸的工程菌的构建方法，其特征在于，其通过将编码L-谷氨酸脱羧酶的基因及其启动子整合到宿主菌枯草芽孢杆菌的染色体上得到的；整合的位点为γ-氨基丁酸转氨酶基因中，整合后使γ-氨基丁酸转氨酶基因失活。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，将所述编码L-谷氨酸脱羧酶的基因整合到宿主菌的染色体是通过pMAD整合载体实现的。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述启动子为grac启动子，来源于pHT01表达载体。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述编码L-谷氨酸脱羧酶的基因来源于微生物。

5.利用权利要求1-4任一所述的构建方法构建的产γ-氨基丁酸的工程菌。

6.权利要求5所述的工程菌在生产γ-氨基丁酸中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述工程菌作为生产γ-氨基丁酸的酶源。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，生产γ-氨基丁酸的方法为：

1)活化培养工程菌种子，并将培养好的种子逐级放大，并在发酵罐中进行好气培养，培养温度30℃，控制pH为6.8-7.0，溶氧20％以上，发酵时间24-30小时；

2)离心或膜浓缩得到菌体，加水稀释，然后加磷酸吡哆醛，逐步添加L-谷氨酸，控制反应液pH在4.0-5.0之间，至反应体系pH不再上升为止结束反应。