[发明专利]一种牛AGPAT6基因单核苷酸多态性的检测方法

权利要求书

1.一种牛AGPAT6基因单核苷酸多态性的检测方法，其特征在于：其检测方法如下所述：

第一步、用牛的全血进行全基因组DNA提取；

第二步、以提取的全基因组DNA为模板，分别以引物对A、B为引物，PCR扩增牛AGPAT6基因；

所述引物对A为：

上游引物：5'TGGCAATGACAGACCTTCAGGAC 3'

下游引物：5'CAGGAGGCTGACAATCAGGCTGT 3'

所述引物对B为：

上游引物：5'CACCTTGTGTCCCTTTCCGC 3'

下游引物：5'AGAACAGCACTCCCCTAGCCCT 3'

第三步、用PCR混合产物测序，找出SNP位点；

第四步、用限制性内切酶BstNI对引物对A的PCR产物进行酶切，用限制性内切酶HhaI对引物对B的PCR产物进行酶切；

第五步、将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，然后根据电泳条带判定其多态性：

引物对A的PCR产物包含AGPAT6基因第1外显子的303bp处的T>C单核苷酸多态性，酶切后，TT基因型个体表现为139bp，102bp，61bp和48bp条带，CC基因型个体表现为163bp，139bp，61bp和48bp条带，TC基因型个体表现为163bp，139bp，102bp，61bp和48bp条带；

引物对B的PCR产物包含AGPAT6基因第12外显子的299bp处的G>A单核苷酸多态性，用限制性内切酶HhaI对引物对B的PCR产物进行酶切后，GG基因型个体表现为119bp，58bp和62bp条带，AA基因型个体表现为177bp，118bp，58bp，和62bp条带。

2.根据权利要求1所述的一种牛AGPAT6基因单核苷酸多态性的检测方法，其特征在于：所述的引物A、B的PCR扩增的反应程序均为：95℃预变性5min；95℃变性30s，61℃退火45s，72℃延伸45s，30个循环；延伸72℃10min，最后16℃保存。

3.根据权利要求1所述的一种牛AGPAT6基因单核苷酸多态性的检测方法，其特征在于：所述的酶切产物琼脂糖凝胶电泳采用4％的琼脂糖凝胶。