[发明专利]栀子蓝色素的制备方法

权利要求书

1.栀子蓝色素的制备方法，其特征在于工艺操作步骤如下：

（1）栀子叶固体培养基的制备

将新鲜的栀子叶洗涤，控干，粉碎，100~120℃灭菌20~120分钟，冷却既得固体培养基；或将含水率1~20%的栀子叶，粉碎，按料液比1Kg:0.2~0.6L加水，混合搅拌5~30分钟，温度100~120℃灭菌20~100分钟，冷却既得固体培养基；

（2）用黑曲霉制备活化原种、一级种子、二级种子，最后制得三级种子；

将黑曲霉（Aspergillus niger）接种于萨氏（SDAY）斜面培养基，温度25～35℃、培养4～7天，得到活化原种；

将活化原种接种到液体种子培养基，接种量为每200～1000mL培养基中接斜面菌种1支；温度25～35℃、转速150～250 rpm条件下，震荡培养3～7天，得到一级种子；

将一级菌种按体积比3～15%的接种量，扩大培养，温度25～35℃、通气量按体积比1:1～1.5、压力0.1～0.15MP条件下，培养3～7天得到二级种子；

将二级菌种按体积比3～15%的接种量，扩大培养，温度25～35℃、通气量按体积比1:1～1.5、压力0.1～0.15MP条件下，培养3～7天得到三级种子；

其中一级菌种、二级菌种和三级菌种的培养基均为液体种子培养基；

（3）接种发酵

将所述三级种子接种至栀子叶固体培养基中，接种量为每100Kg接种5~20L，温度25～35℃发酵培养2～7天，得到固体发酵物；

（4）栀子苷酶解

按料液比1Kg:0.5~5 L将固体发酵物加水打浆，温度50～70℃、酶解4～16小时，得到栀子苷酶解液；

（5）栀子蓝色素生成及纯化

在栀子苷酶解液中按每100L加入0.3~1.2Kg氨基酸，70～90℃保温3～10小时，粗滤或离心分离，对滤液或上清再进行微滤，接着将滤液泵入树脂柱中，吸附饱和，用20～100%乙醇洗脱或0.1～1mol/L的盐酸洗脱，收集蓝色洗脱液，脱去溶剂后得到蓝黑色粉末，即为栀子蓝色素，所述栀子蓝色素在590nm，1cm比色皿，1%浓度时的色价大于190。

2.栀子蓝色素的制备方法，其特征在于具体制备操作步骤如下：

（1）栀子叶液体培养基的制备

将新鲜的栀子叶按料液比1 Kg:0.5~3 L加水混合打浆，在100~120℃，灭菌20~100分钟，冷却既得液体培养基；或将含水率1~20%的栀子叶粉碎，按料液比1 Kg:1~6 L加水混合搅拌5~30分钟，温度100~120℃灭菌20~100分钟，冷却既得液体培养基；

（2）曲霉液体种子制备

将黑曲霉（Aspergillus niger）接种于萨氏（SDAY）斜面培养基，温度25～35℃、培养4～7天，得到活化原种；

将活化原种接种到液体种子培养基，接种量为每200～1000mL培养基中接斜面菌种1支；温度25～35℃、转速150～250 rpm条件下，震荡培养3～7天，得到一级种子；

将一级菌种按体积比3～15%的接种量，扩大培养，温度25～35℃、通气量按体积比1:1～1.5、压力0.1～0.15MP条件下，培养3～7天得到二级种子；

将二级菌种按体积比3～15%的接种量，扩大培养，温度25～35℃、通气量按体积比1:1～1.5、压力0.1～0.15MP条件下，培养3～7天得到三级种子；

其中一级菌种、二级菌种和三级菌种的培养基均为液体种子培养基；

（3）接种发酵

将所述三级种子接种至栀子叶液体培养基中，接种量为每100Kg接种3~15L，温度25～35℃发酵培养2～7天，得到发酵液；

（4）栀子苷酶解

将发酵液升温至50～70℃、酶解4～16小时，得到栀子苷酶解液；

（5）栀子蓝色素生成及纯化

在栀子苷酶解液中按每100L加入0.3~1.2Kg氨基酸，70～90℃保温3～10小时，粗滤或离心分离，对滤液或上清再进行微滤，接着将滤液泵入树脂柱中，吸附饱和，用20～100%乙醇洗脱或0.1～1mol/L的盐酸洗脱，收集蓝色洗脱液，脱去溶剂后得到蓝黑色粉末，即为栀子蓝色素，所述栀子蓝色素在590nm，1cm比色皿，1%浓度时的色价大于190。