[发明专利]一种仿生siRNA胶束纳米复合物及应用

权利要求书

1.一种仿生siRNA胶束纳米复合物，其特征在于：包括壳聚糖、阳离子材料、疏水长链醛、靶向配体和穿内涵体小肽，所述的复合物为以壳聚糖为骨架，阳离子材料和疏水长链醛为核心，靶向配体和穿内涵体小肽通过PEG、腙键共价修饰的仿生型siRNA胶束纳米载体；所述的壳聚糖的分子量为50000～200000；所述的阳离子材料为精氨酸、组氨酸或赖氨酸；所述的靶向配体为脱氧氨基葡萄糖、叶酸、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽或表皮细胞生长因子；所述的PEG的分子量为1500～10000；所述的疏水长链醛为正丁醛、己醛、辛醛、癸醛或十二烷基醛；所述穿内涵体小肽为HA2、L2、蜂毒肽或E5。

2.权利要求1所述的仿生siRNA胶束纳米复合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)胶束亲水外壳的构建：

1.1壳聚糖骨架上修饰羧基：将邻苯二甲酸酐溶于体积比为19:1的DMF/H₂O溶液中，搅拌后按邻苯二甲酸酐与壳聚糖单元体的摩尔比为5～1:1加入壳聚糖，加热反应得到氨基保护的壳聚糖，氨基保护的壳聚糖单元体与溴代乙酸乙酯按摩尔比为1:1～5反应；

1.2 PEG-靶向配体复合物的制备：一端带有CHO的PEG与靶向配体按摩尔比为1:1～5混合，采用DCC/NHS体系进行催化羧基，形成酰胺键，得到CHO-PEG-靶向配体的复合物进一步与水合肼以摩尔比1:1～20反应，得到含腙键的PEG-配体复合物；

1.3将修饰了羧基的壳聚糖采用DCC/NHS体系进行活化后，按壳聚糖单元体与含腙键的PEG-配体复合物摩尔比为1～10:1反应，反应产物与水合肼以摩尔比1:3将产物中保护氨基的壳聚糖脱保护，得到壳聚糖-PEG-靶向配体溶液；

1.4穿内涵体小肽的修饰：选用EDC/NHS体系将小肽羧基活化后，以壳聚糖单元体与小肽的摩尔比为1:0.2～2加入到壳聚糖-PEG-靶向配体溶液中；

2)胶束疏水核心的构建：

2.1 Boc-L-赖氨酸与疏水长链醛按摩尔比1:3反应，搅拌过夜后再加入硼氢化钠反应后，用乙醚进行萃取分离，将反应产物溶于体积比7:3的二氯甲烷/三氟乙酸体系脱去L-赖氨酸氨基上的Boc保护；

2.2赖氨酸与长链醛的反应产物与带正电荷的氨基酸反应：按带正电荷的氨基酸与EDC、NHS的摩尔比1:1.2:1.5用EDC/NHS体系活化后，将步骤2.1产物与活化的带正电荷的氨基酸溶液按摩尔比为1:1～5反应过夜，加入足量乙酸乙酯萃取分离；

3)亲水疏水修饰壳聚糖自组装成胶束：

将疏水核心用DMF溶液溶解，然后使用EDC/NHS体系活化过夜，按疏水核心与壳聚糖单元体的摩尔比为1:0.5～3加入化学修饰壳聚糖骨架得到的胶束亲水外壳，反应12小时后透析，在水溶液中自组装成胶束。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤1.1中邻苯二甲酸酐与壳聚糖单元体的摩尔比为3:1，氨基保护的壳聚糖单元体与溴代乙酸乙酯的摩尔比为1:2。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤1.2中PEG与靶向配体的摩尔比为1:2，PEG与DCC、NHS的摩尔比优选1:1.2:1.5，所述的CHO-PEG-靶向配体复合物与水合肼的摩尔比为1:10。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤1.3中所述的活化条件为修饰了羧基的壳聚糖单元体与DCC、NHS的摩尔比为1:1.2:1.5，所述的壳聚糖单元体与含腙键的PEG-配体复合物摩尔比为2～5:1。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤2.2中赖氨酸与长链醛的反应产物与带正电荷的氨基酸的摩尔比为1:1.5。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤3)中疏水核心与壳聚糖单元体的摩尔比为1:1。

8.权利要求1所述的仿生siRNA胶束纳米复合物作为药物载体的应用。