[发明专利]一株抑制马铃薯立枯丝核病菌的枯草芽孢杆菌

说明书

技术领域

本发明涉及一株枯草芽孢杆菌。

背景技术

丝核菌是一类在自然界中广泛存在的真菌，在全世界的耕作、非耕作土壤中均有分布，许多丝核菌很容易从染病植株及土壤中分离得到。丝核菌的寄主范围极广，可侵染43科200余种植物。丝核菌是一种土传植物病原真菌，容易引起植物烂种、苗期猝倒。丝核菌在土壤中的腐生竞争力强，存活时间长，被认为是最具破坏力的土传植物病原菌之一。丝核菌在菌丝分枝发生点附近缢缩，分枝点附近形成隔膜，菌丝经常呈直角或锐角分枝。生物防治主要是利用微生物之间的拮抗作用，选择对农作物不造成危害的微生物抑制病原菌的生长。细菌、放线菌、真菌在植物病害生物防治中开发应用前景良好，生防菌剂的研究及开发有着重要的现实意义。微生物源农药是目前应用最广、发展最快、最有前途的一类生物农药，是解决我国当前农业环境问题的主要突破口之一。

黑龙江省是马铃薯种植之乡，近年来马铃薯种植面积不断扩大，马铃薯产业发展迅猛。但是由于种薯生产者提供无病种薯的观念不强，用种者常将非种薯做种薯应用，品种引进和调运过程中忽视检疫把关；甚至有的种植区域种薯生产地区，不注意轮作倒茬；还有的在种植过程中对病害的防治措施落实的不认真，种种原因致使马铃薯病害日趋严重。马铃薯立枯丝核病就是其中之一，该病发病普遍，发病率达5％以上，危害程度也在日趋加重，不仅使产量降低20％，而且严重影响马铃薯品质，已成为马铃薯产业发展的一大障碍。

病原菌立枯丝核菌是一种全世界大量农作物和野生寄主的病原物，其菌核在块茎上或土壤里越冬，或菌丝体在土壤里的植株残体上越冬，第二年春季，当温度、湿度条件适合时，菌核萌发侵入马铃薯幼芽、幼苗，特别是有伤口时侵入更多更快。在生长季节又可侵入根、地下茎、匍匐茎、块茎。新块茎上形成的菌核，或在土壤里又越冬的菌核，下一年遇到适宜的环境条件，又可发生侵染。总之，该病是种薯带病和土壤传播结合的病害，因此，给防治带来不便。

发明内容

本发明提供一株枯草芽孢杆菌，可抑制马铃薯立枯丝核病菌，为马铃薯立枯丝核病的生物防治奠定基础。

本发明抑制马铃薯丝核病菌的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)PB12，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2015年3月11日，保藏编号为CGMCC No.10603。

本发明枯草芽孢杆菌PB12革兰氏染色阳性，杆状，两端钝平，多数菌体串联成串，呈不规则形状。产芽孢，30℃培养24h芽孢形成率达80％以上，芽孢端生，椭圆形，不膨大，培养至48h，芽孢全部脱落。在NYDA固体培养基上的菌落呈乳白色，褶皱，边缘不整齐，菌落中心凸起呈脊状，易挑起。

本发明枯草芽孢杆菌PB12在50℃可以生长，pH5.7可以生长，7％NaCl可以生长，厌氧条件下不生长。发酵葡萄糖产酸不产气，接触酶反应阳性，淀粉水解呈阳性，VP试验呈阳性，利用柠檬酸盐反应呈阳性，明胶液化反应呈阳性，石蕊牛奶还原胨化反应呈阳性，硝酸盐反应呈阳性，甲基红反应呈阳性。

本发明枯草芽孢杆菌PB12可在NYD培养基上生长，最适生长温度为30℃，最适pH为7.2～7.5，转速150r/min。NYD培养基由牛肉浸膏8g、酵母膏5g、葡萄糖10g、琼脂15g和蒸馏水1000mL组成。

本发明枯草芽孢杆菌PB12通过16S rDNA序列比对分析，与芽孢杆菌属有极高的同源性，同源性为98％以上。通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果确定枯草芽孢杆菌PB12属于芽孢杆菌属(Bacillus Cohn)，为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

平板抑菌实验和培养瓶抑菌实验表明，在固体培养和液体培养条件下，本发明枯草芽孢杆菌PB12均具有较强的抑制马铃薯立枯丝核病菌菌丝生长的能力，而且随着培养天数的增加，抑菌效果越明显。

本发明枯草芽孢杆菌PB12，属于芽孢杆菌属(Bacillus Cohn)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2015年3月11日，保藏编号为CGMCC No.10603。

附图说明

图1为固体培养时枯草芽孢杆菌PB12的拮抗作用；图2为液体培养时枯草芽孢杆菌PB12的拮抗作用。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。