[发明专利]一种水产生物制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及农业领域水产养殖病害防治领域，一种水产生物制剂及其制备方法和应用，本发明所述的水产生物制剂特别适用于防治水产动物细菌性疾病。

背景技术

目前，用抗生素治疗水产动物的细菌性疾病所产生的严重药物残留及病原菌抗药性使水产类食品的安全问题日益突出，影响了人类健康和水产养殖业的可持续发展。虽然很多抗生素类渔药，如氯霉素、呋喃西林、环丙沙星等已被禁用，但是由于没有高效而廉价的替代品，抗生素仍然作为主要的抑菌药物被使用。伴随着抗生素的滥用，水产病原菌的耐药性呈增长趋势，并产生了多重耐药性菌株(李甘强,水产细菌耐药性的最新研究概况.农业与技术，2014，84(7)：176)。随着人们环保意识的加强和对食品安全要求的提高，从动植物中寻找和提取广谱、高效、低毒、天然的新型抑菌和杀菌物质的研究已成为当前生物渔药研究的热点(张传亮，李小飞，余为一.水产动物常见病原菌的耐药性分析及中草药体外抑菌活性的检测.中国微生态学杂志，2007,19(2)：152-157)。

食药用真菌作为一种可食药用的大型真菌，具有较高的营养价值和药用价值，已被广泛应用于保健品行业。食药用真菌本身为人类的天然食品，对人、畜牧和水生动物无毒害作用，经代谢后，又无残留。目前，已发现某些食(药)用菌的子实体、菌丝体或发酵液中的代谢产物具有一定的抑菌活性(张秋胜，徐丙莲，刘林德，刘浩，程显好，张玉香，10种真菌深层发酵液抑菌活性分析，中国酿造，2010，9：70-72)。该抑菌效果仅是针对普通的细菌(如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)，且其液体发酵培养基为土豆浸出物，不适合工业规模化和标准化生产需要。

目前水产动物的细菌性疾病的治疗方法，主要有抗生素、植物源的杀菌剂等。抗生素易产生耐药性和环境问题，正逐渐限制。而植物源的杀菌剂，主要来源是中药材，如苦参、黄柏等，但中药材来源的生物抑制和杀菌剂，因材料采集困难、批次不稳定、费用较高。

针对上述问题，申请人通过对黄伞和九州虫草深层发酵液对水产致病菌的体外抑菌实验，发现真菌深层发酵液对水产养殖病原菌的抑制活性。黄伞与九州虫草深层发酵液对四种常见的病原菌，如嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌；藻弧菌和鳗弧菌等均具有较强的抑菌和杀菌活性，且这种抑菌和杀菌活性对发酵液的pH值和温度具有广适应性。

九州虫草深层发酵液对四种病原菌的抑菌活性强于黄伞深层发酵液。两种真菌深层发酵液的混合物后对嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌的抑菌活性较单一发酵液的明显增强；两种发酵液的混合物对溶藻弧菌的抑菌活性较单一九州虫草发酵液的有所减弱，但仍强于单一黄伞发酵液。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种水产生物制剂，该水产生物制剂的主效成分为黄伞发酵液与九州虫草的发酵液，黄伞发酵液与九州虫草发酵液的体积比优选为3:2。

本发明的另一个目的在于提供了一种水产生物制剂的制备方法。该方法生产简单，方便易行，适于规模化生产。

本发明的另一个目的在于提供一种水产生物制剂在制备防治水产动物细菌性疾病药物中的应用，本发明提供的水产生物制剂的抑菌和杀菌率达到86.45％，大大减少了水体中养殖对象的发病率。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种水产生物制剂，该水产生物制剂的主效成分为黄伞发酵液与九州虫草的发酵液，黄伞发酵液与九州虫草发酵液的体积比优选为3:2。

一种水产生物制剂，其制备方法包括：

将3块0.5cm²大小的活化黄伞或九州虫草菌丝块接种于装有200ml的液体发酵培养基的1000ml的三角瓶中，放置在旋转摇床上，在26℃条件下，150rpm震荡培养4d。

所述的液体发酵培养基：马铃薯可溶性淀粉100g、葡萄糖20g、益植素0.15g、复合维生素B 10.0mg、MgSO₄.7H₂O 0.5g、水1000ml。

黄伞和九州虫草发酵菌液过滤菌丝体后进行混合，即得。

以上所述的方法，优选的，黄伞或九州虫草在26℃条件下，150rpm震荡培养4d后，可根据生产规模，按1％的接种量进行大型发酵培养，大型发酵培养参数按本领域的常规参数即可。

以上所述的方法，优选的，发酵完毕后，将黄伞或九州虫草发酵菌液分别用三层纱布滤去菌丝体，得到发酵液，再将发酵液用旋转蒸发仪浓缩，按照体积比浓缩20倍，取上清，即获得浓缩了20倍的黄伞或九州虫草深层发酵液。

以上所述的方法，优选的，黄伞发酵液与九州虫草发酵液的体积比优选为3:2。