[发明专利]新的细胞外分泌型核酸酶

说明书

本申请是申请日为2011年9月15日、申请号为201180044912.3、发明名称为新的细胞外分泌型核酸酶的中国专利申请的分案申请。

相关申请的相互参考

本申请要求2010年9月16日提出的日本特愿2010-207598号的优先权，将其全部记载作为公开的内容特别援引于本说明书中。

技术领域

本发明涉及新的细胞外分泌型核酸酶、其制造方法及该制造方法中使用的新的链霉菌属细菌。另外，本发明涉及使用该细胞外分泌型核酸酶的分解核酸的方法。

背景技术

核酸酶(Nuclease)是特异性地分解核酸的核酸分解酶的总称。使核酸酶作用于脱氧核糖核酸或核糖核酸等核酸时，核酸中的糖与磷酸之间的磷酸二酯键水解而生成核苷酸。

核酸酶被分类为EC编号(Enzyme Commission numbers，酶学委员会编号)为EC.3.1的酯水解酶的一种。另外，核酸酶除了分类为分解RNA的核糖核酸酶和分解DNA的脱氧核糖核酸酶以外，还可以根据分解的方式进行分类。

用于催化从序列中间的内部(endo-)将核酸切断的反应的酶称为核酸内切酶。作为代表性的核酸内切酶，可以列举各种限制性内切酶。与此相对，用于催化以从核酸序列的外侧(exo-)朝向内部、从核酸的5’端或3’端进行切削的方式将核酸切断的反应的酶称为核酸外切酶。作为代表性的核酸外切酶，已知核酸外切酶III等。

目前，核酸酶在从研究室规模至工业规模的多种多样的场合中使用。例如，使用核酸酶时，可以利用其核酸分解活性使细胞提取液的粘性降低。因此，分离和纯化细胞提取液中的蛋白质及其他目标物质时，如果使用核酸酶，则可以期待缩短工艺时间、提高目标物质的收量、改善利用离心分离法的分级(颗粒与上清的分离性)、使溶液的过滤(特别是超滤)顺畅、提高层析工艺的效率等。另外，如果在分离和纯化核酸所非特异性吸附的病毒或包涵体等时使用核酸酶，则可以期待使它们的收率提高。此外，如果在用于分析生物试样的ELISA、层析、2D-PAGE或足迹分析等样品制备中使用核酸酶，则能够避免不期望的由核酸引起的测定误差。

作为这样的能够在各种规模和场合下使用的核酸酶，已知来源于沙雷氏菌(Serratia spp.)的核酸内切酶(分别参考作为专利文献1和2的日本专利第2604365号说明书和美国专利第5173418号说明书，专利文献1和2的记载作为公开的内容特别援引于此)。沙雷氏菌属微生物中，有作为机会感染菌而具有病原性的微生物。因此，专利文献1中记载的核酸内切酶利用基因重组技术使用大肠杆菌以分泌到细胞外的细胞外分泌型酶的形式制造。另外，专利文献1中记载的来源于沙雷氏菌的核酸内切酶以ベンゾナーゼ(注册商标)的商品名市售(参考作为非专利文献1的“ベンゾナーゼユニークなエンドヌクレアーゼ(ベンゾナーゼ独特的核酸内切酶)”、[online]、2008年1月1日、メルク株式会社、[2010年7月30日检索]、互联网<URL:http://www2.merck.co.jp/japan/chemical/pdf/info_pdf/071225_Ben zonase_16p.pdf>，非专利文献1的记载作为公开的内容特别援引于此)。

作为非病原性微生物来源的核酸酶，已知放线菌的一种链霉菌属细菌(Streptomyces spp.)产生的核酸酶(分别参考作为非专利文献2～7的Biochem.J.1995 306,93-100；Biochem.J.1992 281,231-237；Appl Microbiol Biotechnol.1995Nov；43(6):1056-1060；Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-General Subjects,Volume 1721,Issues 1-3,18January 2005,116-123；FEMS Microbiology Letters,Volume 237,Issue 2,15August 2004,273-278和Process Biochemistry Volume 40,Issues 3-4,March 2005,1271-1278，非专利文献2～7的记载作为公开的内容特别援引于此)。非专利文献2和3中记载的核酸酶以细胞内蓄积型酶的形式生产。与此相对，非专利文献4～7中记载的核酸酶为分泌到细胞外的细胞外分泌型酶。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第2604365号说明书