[发明专利]一种具有免疫保护性的鲍曼不动杆菌表面抗原SurA1

说明书

技术领域

本发明涉及一种细菌表面抗原重组蛋白，该蛋白涉及疾病亚单位疫苗制备技术领域，同时该蛋白是一种对细胞具有毒力的蛋白。具体涉及一种鲍曼不动杆菌免疫保护性抗原的鉴定，蛋白基因的克隆以及它编码的重组蛋白在疫苗中的应用，同时该蛋白对人类肺上皮细胞A549具有毒性。

背景技术

鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)是一种重要的条件致病菌。近年来由于抗生素滥用，且其耐药性日益严重，已引起研究者的严重关注。A.baumannii主要引起呼吸道感染，也可引发败血症、泌尿系感染、继发性脑膜炎等。A.baumannii在多种严酷环境中分布且可长期存活，对免疫缺陷患者威胁很大。

2011年吉林某鸡场发生一起由于饲料污染鲍曼不动杆菌导致60000多只雏鸡发病、3000多只雏鸡直接死亡的事件，造成严重的经济损失。先前这家公司先后发生3次类似事件，损失都很严重。我们课题组经过剖检、病理观察、病原分离、菌株形态观察和生理生化试验以及基因序列测定等手段，鉴定引起此次雏鸡死亡的病原为鲍曼不动杆菌(CCGGD2011)，并将分离的菌株通过回归实验，感染1周龄雏鸡和6-8周龄小鼠，获得了同样的感染致死能力(菌株保存于吉林大学人兽共患病研究所细菌病实验室)。CCGGD201101引起了雏鸡患病，最终引起大部分雏鸡死亡，表现出较强的致病性，这与常见的鲍曼不动杆菌不同，表现出毒力增强的现象。因为鲍曼不动杆菌耐药性日益严重，对于感染鲍曼不动杆菌后的治疗，常规抗生素可能无效，寻找其主要毒力因子，以此为基础，开发新型的免疫药物，将会对预防鲍曼不动杆菌感染发挥重大作用。

免疫保护性抗原通常是细菌重要的毒力相关因子，在细菌的粘附、侵袭等致病过程和宿主的免疫应答中发挥重要作用。许多鲍曼不动杆菌的表面蛋白已被鉴定为保护性抗原分子，然而由于这部分蛋白的生物学功能尚不清楚，其是否在A.baumannii的致病过程中发挥作用还需要进一步的研究。在致病过程中，病原菌的表面蛋白很有可能直接参与和宿主细胞相互作用。

发明内容

本发明提供一种具有免疫保护性的鲍曼不动杆菌表面抗原SurA1，用于制备鲍曼 不动杆菌亚单位疫苗。

本发明采取的技术方案是：

一种具有免疫保护性的鲍曼不动杆菌表面抗原SurA1，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所述。

编码所述的一种具有免疫保护性的鲍曼不动杆菌表面抗原SurA1的核苷酸，其序列如SEQ ID No.2所述。

包含所述的核苷酸的重组载体pET-28a-SurA1。

包含所述的重组载体的大肠杆菌工程菌株。

所述的具有免疫保护性的鲍曼不动杆菌表面抗原SurA1，对于人类肺上皮细胞A549具有弱毒性,对小鼠具有免疫保护性。

所述的具有免疫保护性的鲍曼不动杆菌表面抗原SurA1在制备鲍曼不动杆菌亚单位疫苗中的应用。

所述的具有免疫保护性的鲍曼不动杆菌表面抗原SurA1在制备用于预防由鲍曼不动杆菌引起的疾病的药物中的应用。

一种包含所述的具有免疫保护性的鲍曼不动杆菌表面抗原SurA1的疫苗组合物。

一种制备具有免疫保护性的鲍曼不动杆菌表面抗原的方法，所述方法包括以下步骤：

构建包含含有SEQ ID No.2所述的核酸序列的重组表达载体；

将所述重组表达载体转到宿主菌中；

培养所述经转化的宿主菌并诱导其表达所述鲍曼不动杆菌免疫保护性抗原；

对所述经过诱导的宿主细胞分离和纯化所述鲍曼不动杆菌免疫保护性抗原。

所述的方法中，宿主细胞是大肠杆菌。

本发明通过荧光差异双向电泳技术对鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,A.baumannii)全组分进行蛋白表达差异分析。目的筛选出抗原性好，保护力强的抗原蛋白，同时筛选出毒力相关蛋白，以期为发展新型亚单位疫苗的研发及血清学诊断标记奠定坚实的基础。