[发明专利]一种与原发性肝细胞癌辅助诊断相关的SNP标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程及肿瘤医学领域，涉及原发性肝细胞癌辅助诊断相关的SNP标志物及其应用。

背景技术

原发性肝癌是世界上最为常见的恶性肿瘤之一，其中肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)约占其85％。据2012年国际癌症研究署(IARC)估计，全球肿瘤发病1410万人，其中肝癌新发病人数达到78.25万，死亡病例达到74.55万，其中有50％发生在中国。据中国国家癌症中心2014年收集的全国2011年肿瘤发病和死亡数据的分析报告，我国新发肝癌病例约35.56万，位居我国所有恶性肿瘤的第四位；死亡病例约32.24万，位居全部癌症死亡病例第二位。因此，肝癌是严重危害我国人民生命健康的最主要癌症之一，是亟需解决的重大公共卫生问题。

肝癌的发生是一个多因素、多阶段的过程，主要环境危险因素包括慢性肝炎病毒(HBV/HCV)感染、饮食摄入黄曲霉毒素和饮水中的微囊藻毒素等。其中，HBV/HCV导致的慢性肝炎病毒感染被认为是肝癌发生最为重要的危险因素，与全球75％的肝癌有关，在发展中国家甚至达到85％。其他危险因素如黄曲霉毒素的摄入等，单独存在时影响较小，其作用机制可能是与病毒感染共同参与肝癌的发生。在这两种病毒中，HBV感染更有普遍性，除日本之外(主要是HCV感染)，HBV感染流行程度基本与全球肝癌发病的地理分布一致。在中国，HBV感染也是首要的危险因素，但HCV的作用同样不可忽视，尤其当合并感染时，危险度的加成更为显著。在中国台湾地区，HBV疫苗接种计划早在1984年就开始实行，对于肝癌发病率的影响已经初步显现。江苏启东地区作为一个传统的肝癌高发区，近年来通过防治肝炎、管粮防霉和改良饮水等综合措施，肝癌在青少年一代开始显示下降的趋势，但疫苗等措施作用的真正体现可能还需要10-20年。

然而，相同的环境危险因素暴露或HBV感染携带者中，仅有少数个体最终发生肝癌， 这说明不同个体对环境暴露的反应存在不同的易感性，这种易感性目前被认为是由个体的遗传因素所决定。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。SNP的存在被认为赋予了个体不同的表型性状，以及对于环境暴露、药物治疗等因素的不同反应性，因此SNP可能是导致个体对常见疾病发病和预后易感性差异的重要遗传基础。利用疾病易感的SNP谱预测疾病的发生，不仅灵敏、准确和快速，具有广阔的应用前景，而且通过SNP预测谱的构建，还可以实现中国古语中“上医治未病”的理想，对疾病作出前瞻性的“基因诊断”。近年来，利用SNP预测疾病的发生发展已经成为临床和科研工作者的研究热点，在肿瘤和心脑血管疾病等常见重大疾病预测上的应用价值已初见端倪。

然而，目前还没有将SNP应用肝癌诊断的报道，若能筛选出肝癌易感的SNP作为生物标志物，并研制相应的诊断试剂盒，对我国肝癌诊断现状必将是一次有力的推动，也为其药物筛选、药效评价及靶向治疗开辟了新的途径。

发明内容

本发明的目的是针对上述技术问题，提出一种与肝癌辅助诊断相关的SNP标志物及其应用。

本发明的第二个目的是提供上述SNP标志物的特异性引物。

本发明的第三个目的是提供上述SNP标志物的特异性延伸引物。

本发明的第四个目的是提供上述SNP标志物及其特异性引物和特异性延伸引物在制备肝癌辅助诊断试剂盒中的应用。

本发明第五个目的是提供肝癌辅助诊断试剂盒。

发明人通过分离和研究肝癌患者及与其年龄匹配的健康对照外周血DNA中的单核苷酸多态性，寻找一组与肝癌高度相关的高特异性和敏感性的SNP，并研制出可便于临床应用的肝癌辅助诊断试剂盒，为肝癌的筛查和诊断提供数据支持，为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物提供数据支持。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：

一种肝癌辅助诊断试剂盒，该试剂盒用于检测外周血DNA中rs7574865、rs1012068、rs17401966、rs2596542、rs455804、rs9272105、rs9275319和rs9275572。

所述的诊断试剂盒，该试剂盒含有上述SNP标志物的特异性引物。

所述的诊断试剂盒，该试剂盒含有的SNP标志物的特异性引物为：

rs10212068的引物序列为SEQ ID No：1、SEQ ID No：2和SEQ ID NO：3；