[发明专利]提取木质纤维素厌氧发酵物料微生物DNA的方法及其成套试剂

权利要求书

1.提取发酵物料中的微生物DNA的方法，包括下述步骤S1)和S2)：

S1)用洗脱液洗下物料上的微生物，得到微生物洗脱液，除去所述微生物洗脱液中的杂质，得到所述微生物；

S2)提取所述微生物的DNA得到所述微生物DNA；

所述发酵物料为含木质纤维素的物质经过发酵得到的发酵产物；

所述发酵为厌氧发酵；

所述洗脱液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其浓度分别为8-10g/L氯化钠、0.1-0.2g/L氯化钾、0.2-0.3g/L氯化钙、0.1-0.3g/L碳酸氢钠和0.1-0.2g/L磷酸二氢钾；

所述除去所述微生物洗脱液中的杂质包括以下步骤：将所述微生物洗脱液进行离心，使微生物进入沉淀中，收集沉淀，将该沉淀命名为沉淀A1；向所述沉淀A1中加入稳定剂，得到微生物-稳定剂混合液；除去所述微生物-稳定剂混合液中的杂质，得到所述微生物；

所述稳定剂由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其浓度分别为5-7mM Tris-HCl和2-4mM乙二胺四乙酸，所述稳定剂的pH为7.5-8.5；

所述除去所述微生物-稳定剂混合液中的杂质包括以下步骤：将所述微生物-稳定剂混合液进行离心，使微生物进入沉淀中，收集沉淀，将该沉淀命名为沉淀A2；向所述沉淀A2中加入洗涤液，得到微生物-洗涤液混合液；除去所述微生物-洗涤液混合液中的杂质，得到所述微生物；

所述洗涤液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其浓度分别为50-70mMTris-HCl、10-20mM EDTA、5.5-6.0g/L NaCl和10-20g/L PVP-40，所述洗涤液的pH为7.5-8.5；

所述所述微生物为吸附在发酵物料上的微生物；

所述S2)包括向所述微生物中加入成套裂解试剂，得到微生物裂解液；除去所述微生物裂解液中的杂质，得到所述微生物DNA；

所述成套裂解试剂由SDS裂解液、蛋白酶K、溶菌酶、纤维素酶、木聚糖酶和GuSCN溶液组成；所述SDS裂解液由水和溶质组成，所述溶质及其浓度分别为90-110mM Tris-HCl、30-50mM EDTA、7-7.5g/500mL NaCl、15-25g/500mL SDS和5-15g/500mL PVP-40，所述SDS裂解液的pH为7.5-8.5；所述GuSCN溶液由水和溶质组成，所述溶质及其浓度分别为90-110mMTris-HCl和55-65g/100mL异硫氰酸胍，所述GuSCN溶液的pH为6.0-6.5。

2.根据权利要求1所述的方法，所述木质纤维素为木质素和/或纤维素和/或半纤维素。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述发酵物料为食草动物的粪便和/或植物全株和/或植物的茎秆经过发酵得到的发酵物。

4.权利要求1-3任一所述方法在提取发酵物料中的微生物DNA中的应用；所述发酵物料为含木质纤维素的物质经过发酵得到的发酵产物；

所述发酵为厌氧发酵；

所述微生物为吸附在发酵物料上的微生物。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述木质纤维素为木质素和/或纤维素和/或半纤维素。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述发酵物料为食草动物的粪便和/或植物全株和/或植物的茎秆经过发酵得到的发酵物。