[发明专利]具有诱导丹参毛状根酚酸积累作用的内生菌及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种丹参内生菌及其用途--用于丹参毛状根培养时可提高酚酸类物质的积累。

背景技术

丹参(学名：Salvia miltiorrhiza)是唇形科鼠尾草属植物，丹参根为中国传统中药。丹参最早在典籍里出现是《神农本草经》，该典籍将丹参列为上品药材，意思就是没有毒性。2010年版《中华人民共和国药典》记载，丹参具有活血通经，清心除烦，祛瘀止痛，消炎养血等作用，主治经闭痛经、月经不调、热痹肿痛、心烦不眠等，尤其是被广泛用于治疗心脑血管疾病，疗效显著。现有研究表明丹参中主要的活性成分可以分为脂溶性的丹参酮类化合物及水溶性丹酚酸类化合物，两者具有不同的药用活性。近年来，水溶性成分的药用价值越来越受到人们的重视，其主要成分包括丹参素钠(3,4-二羟基苯基乳酸)、原儿茶酸、肉桂酸、咖啡酸、对香豆酸、迷迭香酸、丹酚酸A、B、C、E等。2010年版《中华人民共和国药典》中以丹酚酸B含量作为酚酸类物质的指标，用以判断丹参药材的品质。

丹参的市场需求正日益增大，但现有丹参的野生资源有限，且采挖野生丹参会破坏自然环境的生态平衡，丹参资源不能满足人们需求；且不同地区丹参药材质量差别很大，栽培丹参的生长周期长且有效成分含量低；批量生产和临床使用就比较困难。因此通过组织培养丹参细胞、器官等直接获得丹参的有效成分，有可能解决这一问题。基于此，近年来通过发根农杆菌感染丹参产生毛状根并培养得到丹参的主要生物活性物质具有很大的发展潜力。

进一步的研究表明，丹参毛状根生产丹参酮受非生物与生物诱导子的影响。当在毛状根培养体系中添加了适量的Ag⁺、Co²⁺等非生物诱导子和酵母提取物、寡半乳糖醛酸、真菌诱导子等几种生物诱导子后能显著提高产生的丹参酮含量。但当前的研究均集中选用非生物诱导子或生物类诱导子中的真菌或酵母，且产量提高的成分集中在丹参酮类化合物，没有在细菌类诱导子及水溶性酚酸类成分含量提高的研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种内生菌--Olivibacter soli LG3，该菌株可促进丹参毛状根酚酸类物质的积累。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种内生菌，为Olivibacter soli LG3，其保藏号为：CCTCC NO:M 2015084。

本发明还同时提供了上述内生菌的用途：促进丹参毛状根中酚酸类物质含量的积累。酚酸类物质主要是指迷迭香酸、丹酚酸B。

作为本发明的内生菌的用途的改进：促进丹参毛状根增重。

该菌株Olivibacter soli LG3是从丹参植株中采用平板稀释法分离得到一株内生细菌，经鉴定其菌体及发酵菌体具有促进丹参毛状根迷迭香酸和丹酚酸B成分积累的作用。

具体分离方法为：

1)、将丹参的根经表面消毒处理后，加入无菌水进行研磨稀释，涂布于营养琼脂上，于28～32℃培养1～3天；

营养琼脂配方：蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl 5g，琼脂18g和蒸馏水1000mL，pH＝7.2～7.4。

2)、挑取单菌落于相同的营养琼脂平板划线纯化，于28～32℃培养1～3天；

3)、重复步骤2)，直至获得纯培养物。

本发明的内生菌的保藏信息具体如下：Olivibacter soli LG3，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCC NO:M 2015084，保藏时间2015年3月4日。

本发明提供的内生菌-----Olivibacter soli LG3(CCTCC NO:M 2015084)在营养琼脂培养24h后菌落呈圆形，菌落不透明，边缘整齐，表面凸起，产淡黄色色素。

本发明提供的Olivibacter soli LG3(CCTCC NO:M 2015084)革兰氏染色阴性，好氧，杆状，不产芽胞；在生长温度为15～37℃、pH值为6.0～8.0的环境中生长良好，最佳培养温度28℃，最适培养pH为7.0；明胶水解阳性，能代谢葡萄糖、鼠李糖、核糖等产酸。

该Olivibacter soli LG3(CCTCC NO:M 2015084)的16S rDNA序列分析表明与Genbank国际数据库中记录的菌株Olivibacter soli的相似性为99％。

本发明的Olivibacter soli LG3(CCTCC NO:M 2015084)所得的菌体诱导子在丹参毛状根培养体系中分别促进迷迭香酸和丹酚酸B的积累。