[发明专利]皮肤纤维母细胞制剂及其制备方法、应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及皮肤纤维母细胞制剂及其制备方法、应用。

背景技术

皮肤创伤修复是一个复杂的生物学过程。纤维母细胞是这一生物过程中的主要修复细胞之一。皮肤纤维母细胞能够大量合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白、糖蛋白等多种细胞外成分，在伤口愈合和免疫调节等方面具有广泛和明显的作用，具有广阔的应用前景。纤维母细胞还能够维持各种生长因子、细胞素、基质金属蛋白酶及金属蛋白酶组织抑制因子的合成与分解平衡；被认为是创伤修复的工程师、建筑者和管理员。了解与控制纤维母细胞的生物学行为是促进软组织损伤修复、创伤愈合、预防瘢痕形成的基础与关键。

目前流通于市面的烧烫伤皮肤再生修复膏。该烫伤膏在中草药高效有机成分提纯基础上，添加了成纤维细胞生长因子(FGF)，从而在具有抗感染，收敛结痂，减少创面渗液的基础上增加了促进上皮细胞生长，促进坏死组织脱落，减轻瘢痕组织增生的作用。

以上所提及的烧烫伤皮肤再生修复膏虽然比传统药物更好的解决了对烧烫伤治疗时间长、易感染、愈后留有疤痕等问题。但是成纤维细胞生长因子(FGF)在常温下容易被降解，难以保持原有的生物活性。

发明内容

有鉴于此，本发明提供皮肤纤维母细胞制剂及其制备方法、应用。纤维母细胞制成活细胞制剂作用于供体真皮层，很好地克服了上述技术问题，纤维母细胞能够马上分泌出成纤维细胞生长因子(FGF)，并且保持很高的活性，在促进皮肤修复的层面上效果更为明显，而且无任何毒副作用，安全可靠。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种皮肤纤维母细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：

本发明提供了一种皮肤纤维母细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：获得皮肤纤维母细胞，培养；

步骤2：待细胞爬出70％以上时，对贴壁细胞消化、终止消化、重悬、计数、接种培养，获得纤维母细胞；

步骤3：消化纤维母细胞，终止消化，离心，弃上清，洗涤，收集沉淀重悬，获得皮肤纤维母细胞制剂。

在本发明的一些具体实施方案中，皮肤纤维母细胞制剂的制备方法中步骤1所述培养采用完全培养基和双抗培养；所述完全培养基包括高糖DMEM培养基+10％FBS；所述双抗为青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL；

所述皮肤纤维母细胞接种培养密度为5～10×10⁵cell/mL。

所述双抗的浓度为1％。

在本发明的一些具体实施方案中，皮肤纤维母细胞制剂的制备方法中步骤2所述消化为采用0.25％胰蛋白酶消化2～3min。

在本发明的一些具体实施方案中，皮肤纤维母细胞制剂的制备方法中步骤2所述终止消化采用完全培养基，所述完全培养基包括高糖DMEM培养基+10％FBS。

在本发明的一些具体实施方案中，皮肤纤维母细胞制剂的制备方法中步骤3所述消化采用胰蛋白酶溶液，所述胰蛋白酶的酶活为50万U/g；所述胰蛋白酶溶液的浓度为0.25％，所述加入胰蛋白酶溶液的体积为淹没过纤维母细胞。

在本发明的一些具体实施方案中，皮肤纤维母细胞制剂的制备方法中步骤3所述消化的温度为37℃，所述消化的时间为2～3min。

在本发明的一些具体实施方案中，皮肤纤维母细胞制剂的制备方法中步骤3所述离心为1000rpm/min离心5min。

作为优选，洗涤采用生理盐水洗涤。

在本发明的一些具体实施方案中，皮肤纤维母细胞制剂的制备方法中步骤3所述重悬采用生理盐水和白蛋白重悬。

本发明还提供了所述皮肤纤维母细胞制剂的制备方法获得的皮肤纤维母细胞制剂。

纤维母细胞不仅可以合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白等成分，还可以分泌一些重要的细胞生长因子如纤维母细胞生长因子(FGF)，并保持着较高的活性，刺激皮肤肉芽组织的形成和促进肉芽组织的上皮化，从而缩短创伤的愈合时间以及减少疤痕的形成。而且是自体的细胞，不存在排斥性，安全可靠。

本发明还提供了所述皮肤纤维母细胞制剂在制备皮肤再生修复的药物、化妆品、食品、保健品中的应用。