[发明专利]柯萨奇病毒CA16 VP1重组抗原及其单克隆抗体与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一组柯萨奇病毒A16型(CA16)VP1重组抗原及其单克隆抗体与应用，属于分子生物学技术领域。

背景技术

手足口病(Hand foot mouth disease，HFMD)是由肠道病毒引起的一种全球性常见的急性传染病。该病多发生于5岁以下儿童，主要表现为口痛、厌食、低热、手、足、口腔等部位出现小疱疹或小溃疡，少数患儿可引起心肌炎等并发症。个别重症患儿病情发展快，导致死亡。手足口病是由肠道病毒引起的传染病，引发手足口病的肠道病毒有20多种(型)。目前国内爆发的手足口病以柯萨奇病毒A16型(CA16)和肠道病毒71型(EV71)引起最为常见。以往研究多认为CA16引起的手足口病一般症状较轻，致使CV16的研究未能引起足够的重视，但其容易在儿童群体中引起暴发性流行。如果同时感染CA16和EV 71，20％患者可能出现重症炎症及伤害中枢系统造成后遗症。基于此，早发现CA16可有效降低该病毒传播风险，并有助于患者得到及时治疗。因此，研制CA16病毒检测试剂显得尤为重要。

柯萨奇病毒A16型是人类最早发现的柯萨奇A组病毒，1951年在南非被成功分离。该病毒基因组为单股正链RNA，全长约7410个核苷酸，基因组含一个开放读码框，编码一个多聚前体蛋白。该蛋白可进一步被水解成P1、P2、P3等3个前体蛋白。其中P1蛋白可分解为VP1、VP2、VP3和VP4四个外壳蛋白。VP1、VP2、VP3暴露在病毒衣壳蛋白的表面，具有大量抗原决定簇，而其中的VP1最主要的衣壳蛋白，其长度891bp，编码297个氨基酸残基，具有最多的特异性中和位点，因此，VP1蛋白的编码基因序列与病毒血清具有较高的相关性，常被用于病毒的鉴定和进化分析。

高相关的柯萨奇CA16 VP1重组抗原及其单克隆抗体是手足口病检测试剂制备的关键。近年来，基因工程的发展为研制CA16 VP1特异性抗原和单克隆抗体提供了良好基础。故加强研制新型柯萨奇CA16 VP1重组抗原及其单克隆抗体，对开发更加有效的早期诊断CA16病毒的方法和试剂盒具有重要意义。

发明内容

本发明目的在于提供一组柯萨奇病毒A16型(CA16)VP1重组抗原及其单克隆抗体与应用。

本发明所述的一组柯萨奇病毒A16型(CA16)VP1重组抗原，其特征在于：所述重组抗原由SEQ ID No.1～SEQ ID No.8所示的8种氨基酸序列分别与柔性短肽氨基酸序列连接制得；其中，所述柔性短肽氨基酸序列是：GGGGS或GGGGSGGGGSGGGGS或AAY，所述8种氨基酸序列分别与柔性短肽氨基酸序列连接时，每种氨基酸序列均重复3次。

进一步的，所述重组抗原为8种，其编号分别为CA16 VP1 1号～CA16 VP1 8号，其中CA16 VP1 1号～CA16 VP1 8号重组抗原的核苷酸序列分别依次如SEQ ID No.9～SEQ ID  No.16所示。

基于本发明人多年对全国不同疫区的病毒的研究，综合阅读国内外有关CA16文献，本申请选择CA16的VP1蛋白作为抗原靶位的主要研究对象。通过多种生物信息学数据库及生物信息学软件对VP1基因及其编码蛋白序列对比分析，考虑氨基酸序列亲水性，对VP1抗原表位预测，筛选得到CA16病毒8种潜在高交叉反应性的线性亲水表位氨基酸序列，合成基因重组表达，并经过实验验证具有高交叉反应，其氨基酸序列为：

VP1(1-15AA)SEQ ID NO1：GDPIADMIDQTVNNQ

VP1(26-40AA)SEQ ID NO2：LPTAANTEASSHRLG

VP1(47-61AA)SEQ ID NO3：LQAAETGASSNASDK

VP1(94-108AA)SEQ ID NO4：TMPTTGTQNTDGYVN

VP1(156-177AA)SEQ ID NO5：VPPGAPKPTSRDSFAWQTATNP

VP1(183-199AA)SEQ ID NO6：MTDPPAQVSVPFMSPAS

VP1(208-228AA)SEQ ID NO7：YPTFGEHLQANDLDYGQCPNN

VP1(274-293AA)SEQ ID NO8：KTNPNYKGNDIKCTSTSRDK