[发明专利]奥斯特线虫/马歇尔线虫COI基因的扩增引物及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体提供了奥斯特线虫/马歇尔线虫COI基因的扩增引物及其应用。所述奥斯特线虫/马歇尔线虫COI基因的扩增引物如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，其可以有效扩增出现有技术中通用引物LCO1490和HCO2198不能扩增的奥斯特线虫/马歇尔线虫的COI目的片段。满足反刍动物奥斯特线虫/马歇尔线虫的物种分子鉴定需求，同时也能为奥斯特线虫/马歇尔线虫种系发生关系研究、反刍动物胃肠道寄生虫病防控提供可靠的分子技术指导。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及奥斯特线虫/马歇尔线虫COI基因的扩增引物及其应用。

背景技术

反刍动物胃肠道寄生线虫(gastrointestinal nematodes in ruminants)包括毛圆线虫科(Trichostrongyloidae)中毛圆线虫亚科(Trichostrongylinae)以及长刺线虫亚科(Mecistocirrinae)动物线虫。这其中，毛圆线虫亚科奥斯特线虫属(Ostertagia)、马歇尔线虫属(Marshallagia)、背带线虫属(Teladorsagia)、血矛线虫属(Haemonchus)、古柏线虫属(Cooperia)、毛圆线虫属(Trichostrongylus)等6个属对我国北方牧区的放牧家畜危害较大，尤以奥斯特线虫、马歇尔线虫危害严重。奥斯特线虫/马歇尔线虫属于消化道内寄生虫，主要寄生于反刍动物家畜第四胃(真胃)以及肠道的褶皱中。上述寄生虫每年对我国畜牧业造成重大损失，其主要分为以下两个方面：其一为反刍动物感染胃部线虫后，由于机体营养被夺取及有毒物质的产生，影响畜产品的数量和质量，极端情况会导致动物死亡，因此造成大量损失；另一方面，为了防治牛羊胃肠道线虫，定期驱虫消耗的药品产生的费用。

我国目前发现的马歇尔线虫共有许氏马歇尔线虫(Marshallagia hsui)、蒙古马歇尔线虫(Marshallagia mongolica)等9种；奥斯特线虫有达荷奥斯特线虫(Ostertagiadahurica)、布里亚特奥斯特线虫(Ostertagia buriatica)以及西方奥斯特线虫(Ostertagia occidentalis)等15种。反刍动物奥斯特线虫、马歇尔线虫的分类依据主要是基于传统的形态学，借助显微镜观察雄性线虫的交合刺、导刺带、交合伞等器官的形状、长度、大小以及雌虫的阴门构造，结合虫体本身的大小、长度、颜色，以此鉴定虫种。但是，依靠形态学鉴定线虫种类容易出现问题：首先，许多动物线虫样本的形态特征在获取标本或储存时被破坏了；其次，全面掌握所有线虫种类的特征以及区分方法需要耗费大量的时间，而且十分困难；再次，某些不同种类反刍动物奥斯特线虫/马歇尔线虫的形态特征近似，它们之间的形态、大小极为相近，即使经验丰富的专家也难以将它们区分；最后，奥斯特线虫/马歇尔线虫不同种类的形态特征主要体现在雄虫上，其雌虫之间形态学差别较小，依据形态学鉴定较为困难。基于上述原因，研发针对反刍动物奥斯特线虫/马歇尔线虫的分子物种鉴定方法势在必行。

近年来，利用分子技术对物种进行鉴定和系统发生关系研究已经成为一种快速有效的方法，其中线粒体COI基因5’端序列具有物种种间遗传距离大，物种种内序列保守、序列两端有保守序列可设计通用引物等特点成为物种鉴定和研究物种进化关系的理想基因。目前，已经成为DNA条形码(DNA barcoding)技术在动物类群中的标准基因。利用mtCOI基因对反刍动物奥斯特线虫/马歇尔线虫进行物种鉴定和系统发生关系分析具有很好的前景。

在实际研究中，使用Folmer等人于1994年设计的COI通用引物LCO1490和HCO2198在反刍动物奥斯特线虫/马歇尔线虫这一类群中扩增效率较低，阻碍了DNA条形码技术在上述的应用。因此，奥斯特线虫/马歇尔线虫COI基因扩增引物的设计与应用，对利用分子方法鉴定奥斯特线虫、马歇尔线虫物种以及系统发生关系分析具有重要意义，同时也能为反刍动物胃肠道寄生虫流行病学调查提供技术条件。

发明内容