[发明专利]烟草原生质体的高效分离、转化和再生体系

说明书

技术领域

本发明涉及转基因工程领域，具体涉及一种烟草原生质体的高效分离、转化和再生体系。

背景技术

烟草(Nicotiana tabacum L.)是我国重要经济作物。2014年烟草行业工商税利达到10517.6亿元，占全部税利的10％以上。近年来大众对烟叶品质及安全性的需求日益提高，因而加快品种选育是满足这一需求的重要途径之一。同时，烟草是植物转基因的优良受体和细胞遗传学的模式植物，常被用来开展外源基因的表达和功能验证。另外，在生物工程领域常被用作植物生物反应器，有效表达一些有实用价值的蛋白。

植物原生质体是指脱去全部细胞壁的，由质膜包被的具有生命活力的裸露细胞。它具有细胞生命特征和全能型，是细胞无性系变异和突变体筛选的重要来源；是细胞融合工作的基础；是细胞功能学研究的重要手段；是植物遗传工程的理想受体和遗传改良的理想材料。1971年Nagata和Takebe首次获得了烟草叶肉原生质体离体培养再生植株。随后Firoozabady和我国学者徐杏阳、黄文川也利用栽培烟草的叶肉细胞获得了再生植株。但原生质体分离和转化仍存在步骤繁杂、操作不规范、污染率高、转化效率低且不稳定等需要改进的地方。

发明内容

针对现有技术中烟草的原生质体的分离和转化存在步骤繁杂、操作不规范、污染率高、转化效率低的缺陷，本发明提供一种烟草原生质体的分离、转化和再生体系。本发明的第一个目的是提供一种烟草原生质体分离、转化和再生过程中所需的试剂组合，包括1/2MS培养基、A培养基、B培养基、C培养基、MS培养基、MS再生培养基、W5洗液、转化液、含有聚乙二醇的溶液、酶解液、W5洗液和C:B培养基；

所述1/2MS培养基、A培养基、B培养基、C培养基、MS培养基和MS再生培养基的物质组成包括如下试剂：

其中所述MS微量100×的物质组成如下：

成份终浓度mg/LCoCl₂·6H₂O2.5KI83MnSO₄·H₂O1690H₃BO₃620CuSO₄·5H₂O2.5

Na₂MoO₄·2H₂O25ZnSO₄·7H₂O860

所述铁盐1000×的物质组成如下：