[发明专利]一种鸡白痢沙门氏菌SP9905及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种鸡白痢沙门氏菌SP9905，及其在制备活疫苗中的应用和制备方法。

背景技术

鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)引起的家禽常见多发性传染病。鸡白痢在我国的养鸡场普遍存在，表现在育雏、育成阶段死亡率升高，给生产者造成严重的经济损失。国内对于鸡白痢的控制通常采用抗菌药物来减轻其危害，但在选择药物种类、给药途径、方法、剂量与维持时间上比较混乱，存在相当程度的盲目性，滥用或浪费现象非常普遍。同时长期反复用药，不仅使饲养成本上升，而且导致细菌耐药性增强以及禽产品的药物残留等一系列问题。事实证明仅依赖药物控制不是防治鸡白痢的良策。相比之下，采用疫苗免疫，既没有抗生素造成的细菌耐药性与药物残留问题，又可以产生持久的免疫力，因而更容易被养殖者和消费者接受。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸡白痢沙门氏菌SP9905以及其制备活疫苗的应用，具体为一种可通过饮水或采食途径口服免疫的鸡白痢沙门氏菌活疫苗，同时还提供了该鸡白痢沙门氏菌活疫苗的制备方法。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种鸡白痢沙门氏菌SP9905，是从历年来收集、保存的500余株自然病例所分离的鸡白痢沙门氏菌菌种中，经多年反复筛选验证后获得的一株测试结果为天然弱毒的鸡白痢沙门氏菌菌种。

鸡白痢沙门氏菌SP9905(Salmonella pullorum SP9905)已于2014年10月15日送中国典型培养物保藏中心(中国.武汉.武汉大学)保藏，名称及鉴别特征：鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)，株号：SP9905，保藏编号：CCTCC NO.M 2014478。

本发明的提供了所述的鸡白痢沙门氏菌用于制备活疫苗的应用。

本发明的另一目的，由鸡白痢沙门氏菌天然弱毒菌株SP9905制成鸡白痢沙门氏菌活疫苗，用于预防或治疗鸡白痢的用途。

本发明所述的鸡白痢沙门氏菌活疫苗的制备方法，包括如下具体步骤：

1)种子菌液的制备：将鸡白痢沙门氏菌天然弱毒株SP9905菌种经液体培养基复苏繁殖后，接种平板固体培养基，37℃培养20h，挑选典型菌落接种扁瓶固体培养基，37℃培养24h后用液体培养基洗下菌苔，检验合格后作为种子菌液；

2)细菌培养：将种子菌液按培养基总体积的2.5～5.0％接种，经发酵罐37℃深层通气培养18～20h后，收集菌液；

3)疫苗制备：将菌液经4000r/min离心15min去上清，菌泥立即加入灭菌冻干保护剂，充分混匀，分装后经真空冷冻干燥制成鸡白痢沙门氏菌活疫苗，每羽份活菌数不低于2.5×10⁷CFU。

所述的液体培养基组成为：牛肉汤500ml、猪胃消化液500ml、甘油10.0ml、硫代硫酸钠8.0g、山梨醇10.0ml、L-谷氨酸钠2.5g、可溶性淀粉1.2g、葡萄糖10.0g、水解乳蛋白5.0g。液体培养基中加入1.5％的纯化琼脂粉制成固体培养基。

所述的冻干保护剂组成为：脱脂奶粉100g、甘露醇10g、海藻糖50g、蔗糖20g、L-谷氨酸钠1.5g，蒸馏水1000ml。

本发明的有益效果如下：

本发明方法所生产的鸡白痢沙门氏菌活疫苗，培养活菌数为449～517亿/ml，冻干死亡率为14.9～22.5％，具有菌数高、冻干死亡率低的优点。产品安全可靠，其安全剂量达200个免疫剂量。疫苗口服免疫后在第10天即可产生较好的免疫保护力，在第14天可产生坚强保护力，免疫保护率达100％，并且对其它血清型沙门氏菌(肠炎沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌)的攻击同样具有较好的保护能力(80％～100％)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。

实施例1

1)分离纯化与染色镜检