[发明专利]用于饮料中总皂苷含量检测的提纯及检测方法

权利要求书

1.一种用于饮料中总皂苷含量检测的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品预处理：向饮料中加入其0-5倍体积的蒸馏水，混匀；

2)固相萃取小柱预处理：固相萃取小柱先用2-4BV的有机溶剂活化，再用2-4BV的蒸馏水洗涤；

3)样品纯化：将一定量的样品溶液缓慢加入已预处理的固相萃取小柱，先用2-3BV的蒸馏水洗涤，然后用一定量的有机溶剂洗脱，收集洗脱液，所述洗脱液直接用于总皂苷含量的检测。

2.如权利要求1所述的用于饮料中总皂苷含量检测的提纯方法，其特征在于，步骤1)中加入蒸馏水的量根据饮料中的酒精含量而定，以使稀释后的样品中的酒精度数在25度以内。

3.如权利要求1或2所述的用于饮料中总皂苷含量检测的提纯方法，其特征在于，步骤1)中所述饮料为含酒精饮料。

4.如权利要求1所述的用于饮料中总皂苷含量检测的提纯方法，其特征在于，步骤2)中所述固相萃取小柱为反相C18柱或HLB柱。

5.如权利要求1所述的用于饮料中总皂苷含量检测的提纯方法，其特征在于，步骤2)和3)中所述有机溶剂为甲醇或乙醇。

6.一种包括权利要求1所述的提纯方法的饮料中总皂苷含量的检测方法，其特征在于，采用常规的比色法检测样品中总皂苷的含量，并在步骤3)之前的样品溶液中加入内标，在步骤3)的固相萃取之后增加内标得率的测定步骤：

将步骤3)得到的洗脱液采用高效液相色谱法测定内标峰面积，同样条件测定未经过固相萃取小柱处理的内标峰面积，利用面积比计算内标得率；

最后在常规比色法总皂苷含量的计算中将这个内标得率也计算在内(除以内标得率)，即得出最终的样品总皂苷含量值。

7.如权利要求6所述的饮料中总皂苷含量的检测方法，其特征在于，所述内标为三七皂苷R1。

8.如权利要求6所述的饮料中总皂苷含量的检测方法，其特征在于，内标得率的测定步骤中所述高效液相色谱法的检测程序为：流动相A相：纯水，B相：乙腈；梯度洗脱条件(v/v)：0-20min，15-40％B相，流速1mL/min；C18色谱柱；柱温20-40℃；DAD检测器；检测波长为203nm。

9.如权利要求6所述的饮料中总皂苷含量的检测方法，其特征在于，所述常规比色法检测总皂苷的步骤为：

A)显色反应：分别吸取200μL经上述提纯步骤得到的洗脱液和不同浓度的标准品溶液至不同的具塞试管中，在60℃水浴蒸干，加入0.2mL的5％香草醛-冰乙酸溶液，混匀；再加入0.8mL高氯酸，摇匀，在60℃水浴加热15min，取出后迅速冰浴冷却5min，加入5mL冰乙酸稀释，混匀，静置2min；以不加样品或标准品的溶液为空白对照；

B)吸光度值测定：在400-700nm处扫描，确定最大吸收波长，在最大吸收波长下测定吸光度值；

C)样品总皂苷含量计算：根据步骤B)得到的吸光度值制作浓度-吸光度值回归曲线方程，利用标准曲线方程计算样品总皂苷含量。

10.如权利要求9所述的饮料中总皂苷含量的检测方法，其特征在于，步骤A)中所述标准品为人参皂苷Re。