[发明专利]一种酸性β‑葡聚糖酶NGlu及其基因和应用

权利要求书

1.一种β-葡聚糖酶NGlu，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

2.一种β-葡聚糖酶基因GNGlu，其特征在于，编码权利要求1所述的β-葡聚糖酶。

3.根据权利要求2所述的β-葡聚糖酶基因GNGlu，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。

4.包含权利要求2所述β-葡聚糖酶基因GNGlu的重组载体。

5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为pPICzαA-GNGlu，其中，将权利要求2所述β-葡聚糖酶基因GNGlu插入到质粒pPICzαA上的EcoR I和NotI限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于AOX1启动子的下游并受其调控，得到重组载体为pPICzαA-GNGlu。

6.含有权利要求2所述β-葡聚糖酶基因GNGlu的重组菌株。

7.一种发酵制备β-葡聚糖酶NGlu的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）用权利要求5所述的重组载体转化宿主细胞X33，得重组菌株；

2）培养重组菌株，诱导新型β-葡聚糖酶NGlu的表达；以及

3）回收并纯化所表达的新型β-葡聚糖酶NGlu。

8.根据权利要求7所述的发酵制备β-葡聚糖酶NGlu的方法，其特征在于，步骤2）分为三个阶段：

第一阶段为菌体培养阶段，流加已灭菌的2L 50%的甘油或葡萄糖，培养20-24小时，流加甘油或葡萄糖完后结束；

第二阶段为饥饿阶段，甘油或葡萄糖流加完之后，当溶氧上升至80%以上、pH上升即表明该阶段结束；

第三阶段为诱导表达阶段，流加诱导培养基，并且保持溶氧在20%以上，整个发酵培养时间约190小时。

9.权利要求1所述β-葡聚糖酶NGlu用于水解β-糖苷键的应用。