[发明专利]一种肺癌诊断标志物、抗体及其应用

说明书

本发明利用肺癌细胞免疫动物制备了可以特异性识别肺癌组织的特异性单克隆抗体LC128，所述的抗体的保藏号为CGMCC NO.10414,所述的抗体与肺癌组织以及肺癌细胞系呈强阳性反应，与正常组织以及其他非肺癌细胞无交叉反应。通过LC128单抗与肺癌细胞系特异性结合后鉴定细胞系表达的抗原为N3G4，其为异常糖基化修饰整合素β1，其表位为Neu5Acα2‑6GlcNAcβ1‑3Galβ1‑3GlcNAcβ1‑3Galβ1，利用LC128结合免疫磁珠法检测临床样本发现，阳性检出率为86.13%，明显高于常规脱落细胞图片的阳性检出率，说明N3G4是一个良好的肺癌标志物，LC128是一种良好的肺癌诊断试剂。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫学领域。本发明涉及一种新型肺癌肿瘤标志物N3G4，以及抗N3G4的单克隆抗体LC128。细胞和组织学水平证明：LC128特异性识别人肺癌细胞及人肺癌组织。本发明还涉及一个免疫磁珠法检测人肺癌的方法。该检测方法所检测的抗原为本发明中的人的肺癌新型标记物N3G4，检测抗体为本发明中抗人肺癌N3G4的单克隆抗体LC128。

背景技术

肺癌是目前我国最常见的恶性肿瘤之一。我国肺癌的发病率与死亡率正逐年增高。全国肿瘤登记中心2014年发布的数据显示，2010年，我国新发肺癌病例60.59万，居恶性肿瘤首位，占恶性肿瘤新发病例的19.59％。并且多数患者发现时已是晚期，失去早期治疗的机会。肺癌主要有小细胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)(16.8％)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)(80.4％)两种类型。非小细胞肺癌主要有三类：鳞状细胞癌、肺腺癌和大细胞肺癌。其中肺腺癌是最常见的肺癌形式(30％-65％)。肺癌的病因至今尚不完全明确。

如何实现肺癌的早期诊断和治疗是当今医学界肺癌研究的热点课题。据统计，早期非小细胞肺癌的5年生存率高达80％，而非小细胞肺癌总的5年生存率仅为15％(Mulshine JL,Sullivan D.Clinical p ractice.Lung cancer screening[J].N Engl JMed,2005,352(26):271422720.)。可见，肺癌的早期诊断和治疗显得极其重要。目前用于肺癌的诊断方法主要有：痰细胞学检查、影像学检查、内窥镜检查以及活组织检查。痰细胞学具有极低的灵敏度。肺癌的影像检查方法主要包括：X线胸片、CT、磁共振成像(magneticresonance imaging,MRI)、超声、核素显像、正电子发射计算机断层扫描(positronemission tomography/computed tomography,PET-CT)等方法，但影像学检查也是相对不灵敏的，要求病变大小大于1厘米才可见。内窥镜检查要求肿瘤在内窥镜可靠近的气道内可见。虽然目前最公认的诊断方法是低剂量的胸部CT，但灵敏度也有局限，与X线胸片一样，CT涉及电离辐射，其自身也引起癌症。

但由于早期患者症状不典型，诊断率仅为15％(祝晋芳等，肺癌血肿瘤标志物早期诊断研究进展[J].医学综述,2010,16(7):1015-1018)。传统的肺癌筛查方法由于其特异性及灵敏性有限，再加上过程痛苦、费用高等缺点使高危人群的依从性差，因此传统的肺癌筛查方法并没有降低肺癌的病死率。因此，需要可以替代或补充传统肺癌筛查的方法，以提高肺癌早期的诊断率，以及减少外科手术的次数以降低手术并发症的危险。近年来，肿瘤标志物由于其特异性和灵敏度高等特点，对肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗具有提供指导意义。有研究表明整合素β1参与肺癌细胞的侵袭和转移(宫雪，陈骊珠等，整合素与肿瘤侵袭和转移的研究进展[J].2007,23(15):2288-2289.)。整合素是由α、β两个亚基构成的异源二聚体，其功能涉及细胞与基质、细胞与细胞的粘附，参与细胞信号转导，调节的细胞增殖与凋亡，以及肿瘤细胞的粘附、侵袭、转移和血管形成。整合素β1亚基(CD29)与α3亚基(CD49c)结合形成二聚体。整合素α3β1主要街道细胞与细胞外基质成分直接的粘附，此外整合素α3β1的异常修饰导致肿瘤细胞恶性程度的改变。因此发现新型整合素修饰形式对于肺癌的诊断和治疗具有积极的意义。

发明内容