[发明专利]凤阳产气霉制剂

说明书

技术领域

本发明涉及生物农药领域，尤其是提供一种内生真菌制剂，更确切的说，是能够产生抑菌活性气体的凤阳产气霉制剂。

背景技术

产气霉(Muscodor spp.)(现在也称麝香霉)是一类属于炭角菌科的内生真菌，最早由Worapong等(2001)从肉桂树分离所得，其显著特征是能产生挥发性有机化合物(volatile organic compounds，简称VOCs)，这些VOCs具有广泛的生物活性，能抑制或杀死许多病原真菌、病原细菌和一些昆虫。而后，人们利用其特有的形态学、生理学、生物化学方面的特征及核糖体RNA的序列来寻找和鉴定新的产气霉属内生真菌，越来越多的产气霉种被发现。由于产气霉能产生有广泛抑菌活性的VOCs，科学家们利用GC-MS等化学分析手段分离鉴定了产气霉产生的VOCs成分，发现不同菌株产生的VOCs成分不尽相同。

生物制剂的开发中非常重要的环节是通过发酵规模化生产。发酵分为固体发酵和液体发酵。固体发酵(solid-state fermentation，SSF)是在指不存在或几乎没有自由水(基质必须具有足够的湿度支持微生物的生长和代谢)的条件下进行发酵。(Pandey等，1992；1994；2000；2001)。从生物反应过程的角度考虑，固态发酵是以气相为连续相的生物反应过程，我们可以认为固体发酵是一种在培养基为固体载体的基础上进行利用的一种发酵手段(Mitchell等，2000)。

固体发酵与液体发酵相比有许多显著的优点：发酵原料成本低(经常是农业废弃物)，能源消耗低，操作简单，较少的废水产生；对无菌要求相对较低，不易发生大面积的污染；单位体积的产量高，能用较小的反应器进行发酵；并且对环境友好，因为此技术解决了固体废弃物的处置问题(Pandey等，2008；Matthew等，2009)。SSF由于发酵环境类似于微生物的自然习惯，对于微生物来说，SSF十分适合其生长并且能产生有价值的副产品。固体发酵已经成为一种应用于生产微生物产品如饲料、燃料、工业化学品和医药产品的有潜力的技术。

关于固体发酵的发展可追溯至20世纪50年代。利用真菌培养转化类固醇，利用SSF生产出霉菌毒素产物，固体发酵生产富含蛋白质的牛饲料(此过程中包括了农用工业废渣的利用，因此提供了对低成本废渣增值的独特工艺开发，Singhania等，2009)；这一系列固体发酵的成果引起了研究者们对SSF的兴趣，SSF取得了空前的发展(Singhania等，2009)。关于SSF的基础研究、生物反应器的发展、建模和生产不同的微生物产品(如食物、饲料、不同的基础和次级代谢产物以及如生物浸出、生物制浆、生物修复、生物选矿的生物过程)等方面产生了大量研究。

至今，有许多人研究影响固体发酵进程的生物化学和工程学的因素(Mitchell等，2000a，2000b；Pandey，2003)，虽然SSF中的许多技术细节仍未得到解决(等，2004)，但SSF在生物技术中的运用仍十分广泛(Raimbault等，1998；Pandey等，2000a，2001b)。毒素、细菌内毒素、植物生长因子、抗生素、免疫抑制药物、生物碱，这些重要的生物活性物质已经被广泛报道通过SSF生产。工业酶，如淀粉酶，纤维素酶，木聚糖酶，蛋白酶，植酸酶，脂肪酶等，有机酸如柠檬酸和乳酸等也已通过SSF大量生产(Krishna等，2005)。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种凤阳产气霉制剂。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种凤阳产气霉制剂，该凤阳产气霉制剂为凤阳产气霉的固体发酵产物；所述凤阳产气霉固体发酵产物的制备方法为包括以下步骤：

将凤阳产气霉的一级发酵种子(即液体发酵种子)按照10～20ml:100g(较佳为20ml:100g)的用量比接种于发酵基质上进行发酵，发酵工艺为：于24.5～25.5℃(较佳为25℃)黑暗静培养，培养时间为8～10天；得固体发酵产物。该固体发酵产物能直接作为凤阳产气霉制剂。

作为本发明的凤阳产气霉制剂的改进：所述凤阳产气霉制剂为将固体发酵产物进行营养液包衣并风干后的所得物；制备方法为：

配制营养液，所述营养液为以下任意一种：3％～5％的海藻糖水溶液、3％～5％的海藻酸钠水溶液、0.1％～0.2％黄原胶水溶液、水(较佳)，上述％均为质量％；

将固体发酵产物按照1g:0.9～1.1ml(较佳为1g:1ml)的固液比浸泡于灭菌后营养液中，浸泡时间为10～12小时(较佳为10小时)；