[发明专利]抑制肿瘤生长的重组间充质干细胞及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学和医学领域，具体涉及一种抑制肿瘤生长的重组间充质干细胞及其制备方法与应用。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)存在于几乎所有的组织中，并且已从肌肉、骨髓、脂肪组织、牙髓、脐带、胎盘和羊膜液中分离出。MSCs被认为是具有强大的自我更新能力和多向分化潜能的非造血干细胞，在再生医学中具有极其重要的治疗学意义。根据不同的用途可以特异性的将MSCs向不同的亚型转化，更精确的发挥MSC的功能。

TNFα诱导蛋白3(tumor necrosis factorαinduced protein 3，TNFAIP3，A20)被认为是重要的抗炎和免疫调控蛋白。大多数细胞中A20都是低表达的，当NF-κB被TNFα等炎性因子活化后，会与A20启动子区的NF-κB受体结合，A20会迅速被活化并且负调控NF-κB、MAPK等通路，从而改变IFNγ、TNFα、IL-12、IL10、IL-15和IL-21在内的多种细胞因子的表达水平。

发明内容

本发明的目的是提供一种抑制肿瘤生长的重组间充质干细胞及其制备方法与应用。

本发明提供的重组间充质干细胞,是降低受体间充质干细胞中A20基因表达量得到的重组间充质干细胞；所述受体间充质干细胞为离体的间充质干细胞；所述A20基因是TNFα诱导蛋白3。所述降低受体间充质干细胞中A20基因表达量是通过向所述受体间充质干细胞中导入抑制所述受体间充质干细胞中A20基因表达的物质实现的。所述A20基因为编码序列表的序列3所示的蛋白质的基因。所述A20基因为包括序列表的序列4自5’末端第78-2516位核苷酸所示DNA分子的DNA分子。所述A20基因具体可为序列表的序列4所示的DNA分子或序列表的序列4自5’末端第78-2516位核苷酸所示的DNA分子。所述抑制所述受体间充质干细胞中A20基因表达的物质可为任何可以降低所述受体间充质干细胞中A20基因表达的shRNA、编码所述shRNA的DNA分子、表达所述shRNA的表达载体、表达所述shRNA的重组微生物(如病毒)；抑制所述受体间充质干细胞中A20基因表达的物质还可为降低所述受体间充质干细胞中A20基因表达的siRNA、编码所述siRNA的DNA分子、表达所述siRNA的表达载体、表达所述siRNA的重组微生物(如病毒)。所述抑制所述受体间充质干细胞中A20基因表达的物质具体可为序列表的序列1所示的shRNA。所述抑制所述受体间充质干细胞中A20基因表达的物质具体可为将序列1所示的shRNA的编码DNA(将SEQ ID No.1的核苷酸U替换为T的双链DNA)插入慢病毒载体GV112的多克隆位点(如HpaⅠ和XhoⅠ位点间)得到的重组质粒。所述受体间充质干细胞为小鼠骨髓原代MSCs或小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2。

本发明还保护制备所述重组间充质干细胞的方法，包括如下步骤：降低受体间充质干细胞中A20基因表达量，得到所述重组间充质干细胞；所述受体间充质干细胞为离体的间充质干细胞；所述A20基因是TNFα诱导蛋白3。所述降低受体间充质干细胞中A20基因表达量是通过向所述受体间充质干细胞中导入抑制所述受体间充质干细胞中A20基因表达的物质实现的。所述A20基因为编码序列表的序列3所示的蛋白质的基因。所述A20基因为包括序列表的序列4自5’末端第78-2516位核苷酸所示DNA分子的DNA分子。所述A20基因具体可为序列表的序列4所示的DNA分子或序列表的序列4自5’末端第78-2516位核苷酸所示的DNA分子。所述抑制所述受体间充质干细胞中A20基因表达的物质可为任何可以降低所述受体间充质干细胞中A20基因表达的shRNA、编码所述shRNA的DNA分子、表达所述shRNA的表达载体、表达所述shRNA的重组微生物(如病毒)；抑制所述受体间充质干细胞中A20基因表达的物质还可为降低所述受体间充质干细胞中A20基因表达的siRNA、编码所述siRNA的DNA分子、表达所述siRNA的表达载体、表达所述siRNA的重组微生物(如病毒)。所述抑制所述受体间充质干细胞中A20基因表达的物质为序列表的序列1所示的shRNA。所述抑制所述受体间充质干细胞中A20基因表达的物质具体可为将序列1所示的shRNA的编码DNA(将SEQ ID No.1的核苷酸U替换为T的双链DNA)插入慢病毒载体GV112的多克隆位点(如HpaⅠ和XhoⅠ位点间)得到的重组质粒。所述受体间充质干细胞为小鼠骨髓原代MSCs或小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2。