[发明专利]可用于检测与大肠癌相关的PCDH‑γ‑A12基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助诊断大肠癌的检测试剂盒，尤其是涉及一种可用于检测与大肠癌相关的PCDH-γ-A12基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用。

背景技术

大肠癌(Colorectal Cancer, CRC)又称结直肠癌，是消化系统中常见的恶性肿瘤。目前研究表明大肠癌是大肠黏膜上皮细胞在遗传和环境等多种复杂的因素共同作用下，发生遗传和表观遗传的改变而获得无限增殖，躲避凋亡程序等能力，从而在局部形成肿块。近年来，随着人们生活水平的提高，饮食习惯与结构的改变，加之人口老龄化趋势的影响，我国大肠癌的发病率和死亡率增长迅速，而且，发病年龄明显提前。世界卫生组织(WHO)发布的《全球癌症报告2014》显示中国癌症新增病例和死亡人数的绝对数值位居世界首位。其中以胃癌、食道癌、大肠癌为代表的消化道癌症威胁最为显著。尽管目前手术方式和辅助治疗手段不断改进，大肠癌的患者的术后生存情况有了较大的改善，但是CRC患者的五年总体生存率仍旧不高，其中最重要的一个因素就是，许多患者在疾病发生的早期没有得到及时的诊断和治疗。因此，有必要探索其他分子指标独立或者联合CEA 等检测，对大肠癌患者做到早发现，早诊断，早治疗，提高大肠癌患者总体生存率。

原钙粘附蛋白家族(protoeadherin family)是钙粘蛋白超家族中一个最大的亚族。其根据基因结构的不同，原钙粘附蛋白家族(protoeadherin family)主要由两类构成：聚集型原钙粘附蛋白和非聚集型原钙粘附蛋白。原钙粘附蛋白伽马亚家族(protoeadherin gamma subfamily,PCDH-γ)是聚集型原钙粘附蛋白中一类重要的亚族，包括原钙粘附蛋白伽马亚家族A12 (protoeadherin gamma subfamily A12，PCDH-γ-A12)在内，共有22位成员。原钙粘附蛋白伽马亚家族A12 (protoeadherin gamma subfamily A12,PCDH-γ-A12)位于5号染色(chr5:140254931-140257434)，其编码的细胞表面粘附蛋白，在细胞和细胞间，细胞和细胞基质间相互作用以及肿瘤转移过程中发挥重要作用。有研究表明，在原发人脑胶质瘤组织中，原钙粘附蛋白伽马亚家族中原钙粘附蛋白伽马亚家族A11成员(protoeadherin gamma subfamily A11，PCDH-γ-A11)启动子序列因表观遗传甲基化修饰而失活，该基因启动子甲基化可能成为胶质瘤恶性程度和预后评价的分子生物学标记。而目前，国内外还没有公开任何关于在大肠癌中用于检测原钙粘附蛋白伽马亚家族A12 (protoeadherin gamma subfamily A12，PCDH-γ-A12)基因启动子区甲基化程度的检测试剂盒相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测方便、针对性强、检测准确率高的可用于检测与大肠癌相关的PCDH-γ-A12基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用，其中基因PCDH-γ-A12甲基化水平与大肠癌的患病率呈正相关，可通过对样品DNA甲基化水平测定辅助诊断大肠癌。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种可用于检测与大肠癌相关的PCDH-Γ-A12基因启动子区甲基化程度的试剂盒，包括PCDH-γ-A12基因启动子区的甲基化特异性扩增上游引物、下游引物及其未甲基化特异性扩增上游引物和下游引物，其中所述的甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

5’-ATTAAGGTGGTGGCGGTGGAT -3’；

所述的甲基化特异性扩增下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：

5’-GACGCCGACGCTCCTATCAA -3’；

所述的未甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示：

5’-AAGGTGGTGGTGGTGGATAG -3’；

所述的未甲基化特异性扩增下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示：

5’-ACCAACACTCCTATCAAAC -3’。

一种可用于检测与大肠癌相关的PCDH-γ-A12基因启动子区甲基化程度的试剂盒的应用，该试剂盒可用于大肠癌辅助检测、诊断或药物治疗中。