[发明专利]一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物药物载体制备领域，尤其涉及一种以血小板作为药物载体携载抗肿瘤药物的制备方法。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康和生命的一大疾病，且发病率有逐年升高的趋势，目前主要的治疗方法包括手术治疗、化疗和放疗，但对于一些晚期病人通常不能行手术治疗，另外对于一些患有恶性程度较高的肿瘤的患者，在手术治疗前后往往会辅以化学治疗，因而化疗在当今肿瘤的治疗中仍占有很重要的地位。但是化疗具有明显的副作用，包括骨髓抑制、免疫功能低下、消化道反应等，所以研究和开发能将抗肿瘤药物传递到肿瘤细胞内部或周围以期较少副反应的药物载体具有十分重要的意义。

目前而言，药物载体主要包括磁性纳米药物载体、脂质体载体、微粒载体等，但它们均存在诸多缺点，如载药率不高，稳定性较差，毒性作用较强等，因而生物药物载体凭借其良好的生物相容性、缓控释药等特点在众多载药体系中脱引而出。

以生物作为药物载体的研究已进行了很多年，研究较为深入的包括白蛋白载药和红细胞载药等。临床上应用成功的典型范例是以人血清白蛋白为载体的紫杉醇产品，研究显示其可在肿瘤细胞和组织中蓄积，可用于治疗乳腺癌、卵巢癌等。另外的研究显示，经红细胞包载后释放的甲氨蝶呤和长春新碱等药物，抑制肿瘤生长及诱导其凋亡的效果较裸药更为显著。

血小板是从骨髓成熟的巨核细胞脱落下来的碎片，直径约2um，在成人血液中数量约为（1-3）×10¹¹个/L，其寿命约7-14天，平均9天，衰老的血小板大多被肝脏中的Kupfer细胞清除，因而血小板具有良好的生物相容性、安全性及较长的血循环时间。血小板在止血、愈合伤口、血栓形成等过程中起着重要作用，并且与肿瘤的发生发展也具有密切的关系。肿瘤细胞经过一系列反应活化血小板，活化的血小板通过肿瘤细胞诱导的血小板聚集（TCIPA）作用聚集在肿瘤细胞周围，形成血小板-肿瘤细胞复合物，正是这种作用促进了血小板与肿瘤细胞的粘附，并且活化后的血小板将摄取的药物释放，而血小板摄取药物及小颗粒的作用与巨噬系统的吞噬作用不同，即不会将内吞的物质杀死和清除，从而保证了药物原有的结构和活性，保留了药效。另外研究显示，血小板的载药率远高于纳米颗粒的载药率，且血小板与细胞毒药物具有协同作用，可以增加其杀伤作用。因此以血小板作为药物载体，具有含量丰富、生物相容性高、载药率高、增加细胞毒药物作用的优势，但目前就血小板作为药物载体的相关研究仍较少。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种以血小板作为药物载体携载柔抗肿瘤药物的制备方法，制成包载抗肿瘤药物的血小板载药体系，具有载药率高、在肿瘤组织的酸性环境中释放率高，并且可增加药物的抗肿瘤特性的优点。

为达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现的。

一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法，包括以下步骤：

（1）环境温度为20±5℃，在全血中加入重量百分含量为2-4%柠檬酸钠溶液，离心后得到血小板丰富血浆；

（2）将步骤（1）得到的血小板丰富血浆再深度离心，并用PBS缓冲液洗涤至不再含有血浆及其他血液成分，得到洗涤血小板；

（3）将步骤（2）得到的洗涤血小板与抗肿瘤药物在37±0.5℃的避光环境中震荡反应1~2小时，得到抗肿瘤药物与血小板反应物；

（4）将步骤（3）得到的抗肿瘤药物与血小板反应物通过琼脂糖凝胶2B分离柱分离，并离心洗涤，得到携载抗肿瘤药物的血小板载药体系。

所述步骤（1）中，全血与重量百分含量为2-4%柠檬酸钠溶液的体积比为7:1~10:1。优选为9:1。

所述步骤（1）中离心为以1200rpm离心10~15min。

所述步骤（2）中深度离心为以3600rpm离心8~12min。

所述步骤（2）得到洗涤血小板计数控制在(2.5-3.0)×10⁵/ul。

所述步骤（3）中抗肿瘤药物为蒽环类抗肿瘤药物、生物碱类抗肿瘤药物或烷化剂类抗肿瘤药物的一种，抗肿瘤药物的浓度为0.05~0.15mmol/L。

所述蒽环类抗肿瘤药物优选柔红霉素，生物碱类抗肿瘤药物优选长春新碱，烷化剂类抗肿瘤药物优选环磷酰胺。

所述步骤（3）中抗肿瘤药物与洗涤血小板的体积比为1~4:1。优选为2:1。

所述步骤（4）中离心洗涤是用PBS缓冲液以12000rpm离心洗涤2~3次，每次2~4分钟。

有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：