[发明专利]一种香石竹组培快繁方法

说明书

技术领域

    本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种香石竹组培快繁方法。

背景技术

香石竹（Dianthus caryopHyllus L），又名康乃馨，为石竹科石竹属多年生宿根草本花卉，凭借其生产性高,观赏性好,耐贮运等优点,成为当今世界上栽培最普遍的商品切花的主栽品种之一。这些年,香石竹凭借其独有的特性,深受广大消费者喜爱,被广泛用于各类礼品装饰、高档花卉之中。1910年我国从荷兰引种栽培,经过长期的发展,我国己成为香石竹切花生产国大国之一。目前，上海、云南则成为我国香石竹种苗的繁育中心,主要从荷兰、以色列、德国和法国引进香石竹品种母本苗,经筛选,建立育苗体系,培育壮苗。除此之外,江苏、浙江、北京、宁夏等地也有一定的香石竹生产面积,并向适栽区规模化发展。但我国目前的香石竹品种主要从国外引进,这种方式虽能跟上世界香石竹品种的流行趋势,但生产成本高,常受制于人,所以我们还应加强香石竹育种的研究开发,育出适合我国气候条件、抗病抗逆、观赏价值高的,具有我国自主知识产权的香石竹新品种。利用优质的种苗,标准化的栽培管理技术,生产出符合国际花卉市场标准的香石竹鲜切花,批量出口国外,参与到国际市场的竞争。

香石竹种苗的繁殖常用采用传统的扦插方式,随着繁殖代数的不断增加,易在植株体内积累病毒,从而降低香石竹的产量和品质。为满足生产过程中对香石竹品质及品种多样性的需求,通常采用组织培养技术进行种苗的快繁来满足市场的需求,不仅能保持植物亲本优良性状,在短期内获得大量优质种苗,而且也是有效克服病毒的重要措施。因此，本发明以香石竹侧芽为外植体，通过不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了香石竹离体再植株，建立香石竹组织培养快速繁殖技术体系，以促进香石竹组培苗规模化生产。

发明内容

    本发明的目的在于提供出一种香石竹组培快繁方法，本发明以香石竹侧芽为外植体，通过不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了香石竹离体再植株，建立香石竹组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种香石竹组培快繁方法，包括以下的步骤：

（1）诱导培养：取生长健壮的侧芽,去除叶片,在超净工作台上用75%酒精消毒30～60s,再0.1%升汞溶液消毒8～15min,最后用无菌水漂洗3～5次。消毒后,在双目解剖镜下,用解剖刀将外部的嫩叶茎基部完全剥去,让茎尖充分暴露,将茎尖切下，长度为0.3～0.5mm,带有2～4个叶原基,切后迅速接种于诱导培养基进行不定芽诱导培养。接种后置于每天光照24小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养14天后统计污染率，30天后统计诱导率。

    （2）增殖培养：将诱导所得到的长至2cm左右的丛生芽再分割成2～3个芽的芽丛接种到增殖培养基上进行继代培养。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养30天后统计增殖情况。

（3）生根培养：将芽增殖培养基中1～4cm长的正常生长的新芽切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养30天后统计生根情况。

（4）炼苗移栽：将香石竹试管苗平均长出3～5条大于3cm长的健壮粗根后,将组培苗的瓶盖打开,附上湿润报纸,让小苗适应移栽后的温度和环境变化,3～5天后将生长健壮的小苗用镊子轻轻取出,在自来水中洗净粘附在根上的培养基,将小苗移栽入已消毒好的由园土:泥炭土:腐殖质＝2:1:1混合成的基质中,盖上塑料薄膜,定时浇水,平均每3～5天浇水一次,注意空气温度的调控，移栽30天后统计成活率。

    上述步骤（1）所述的诱导培养基为：改良MS（Mg和Fe加倍）+0.1～0.5mg/LNAA+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.5～1.0mg/LKT+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

    上述步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.0～2.0mg/L TDZ+0.1～0.5mg/L KT+0.1～0.5mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。